Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii

Předmět je zaměřen na získání teoretických znalostí a praktických zkušenosí s moderními spektroskopickými metodami analýzy struktury a vzájemné interakce nukleových kyselin a proteinů. Z metodických přístupů bude zvláštní důraz kladen na vysoce citlivé fluorimetrické metody a jejich praktické použití v laboratorní praxi. Součástí výuky je blok navazujících praktických cvičení, což umožní experimentální ověření získaných teoretických poznatků za použití moderního laboratorního vybavení.

Přednášky Protein_laser

  1. Základní přehled biofyzikálních metod používaných v biologii
  2. Definice a charakteristiky absorbce, fluorescence a fosforescence
  3. Přístrojové vybavení pro měření - spektrofotometr, spektrofluorometr 
  4. Časově ustálená fluorescence (Steady state)
  5. Časově rozlišená fluorescence (Time-resolved) 
  6. Anizotropie fluorescence a její změna při interakci makromolekul 
  7. Absorpční spektroskopie v biologické analýze molekul 
  8. Zhášení fluorescence, fluorescenční rezonanční přenos energie - použití při sledování strukturních změn molekul 
  9. Vlastní fluorescence biologicky významných molekul 
  10. Nevlastní fluorescence - fluorescenční značky, sondy a indikátory 
  11. Fluorescenční značení DNA a proteinů 
  12. Fluorescenční mikroskopie 
  13. Analytické použití fluorescence pro stanovení koncentrace 
  14. Příklady využití fluorescence v biologické praxi


Praktické úlohy

  1. Měření spektrálních charakteristik proteinů a nukleových kyselinZnaceniProteinu
  2. Přesné stanovení koncentrace nukleových kyselin a
    proteinů za použití fluorescence a absorbční spektroskopie
  3. Vliv pH a teploty na spektrální vlastnosti fluorescenčních sond
  4. Měření vlastní fluorescence albuminu, tryptofanu, tyrozinu a fenylalaninu
  5. Příprava fluorescenčně značeného proteinu
  6. Spektroskopická charakteristika fluorescenčně značené DNA a proteinu
  7. Vizualizace makromolekul při elektroforetické separaci
  8. Real-time PCR - detekce amplifikace DNA
  9. Mikroskopie živých rostlin značených GFP
  10. Fluorescenční mikroskopie (fluorescenční in situ hybridizace)
  11. Studium vazby molekul za pomocí anizotropie fluorescence – vazba proteinu a fluorescenčně značené DNA

    Fotogalerie


    Předmět byl zaveden za finanční podpory Fondu rozvoje vysokých škol (č.p. 1066/2007)

    Výuka praktických úloh probíhá za odborné spolupráce a podpory následujících společností
    InvitrogenKRDLabimexolympus