Bakteriální spory



            Některé bakteriální rody (Bacillus, Clostridium, Desulfotomaculum, Sporosarcina,
   Sporolactobacillus, Oscillospira, Thermoactinomyces) mohou tvořit klidové formy zvané spory
   (endospory; vznikající uvnitř buňky). Povrch spor je tvořen silným, špatně propustným obalem.
   Proto jsou velice odolné vůči působení vnějších vlivů, toxinů. Jsou rovněž obtížně barvitelné.
   V preparátech barvených běžnými technikami se obarví pouze jejich obal. Proto se barví po
   předchozím moření nebo za horka pomocí silných barviv – takto se těžko odbarvují kyselinami
   (acidorezistence) i jinými sloučeninami.

   

   Metody pozorování:

   1)    po barvení

   -         malachitovou zelení  - Schaefferova-Fultonova metoda

                                           - Wirtzovo a Conklinovo barvení

   -         Möllerova metoda

   -         Ziehl-Neelsenovým roztokem - karbolfuchsin

   2)    fázovým kontrastem

   3)    Nomarského kontrastem

   

   Mikroorganismy:

   

   

   Postupy:

   

A.      Barvení malachitovou zelení - Schaefferova-Fultonova metoda

   1)     Uschlý nátěr buněk na sklíčko fixujeme trojím protažením v plameni

   2)     Převrstvíme malachitovou zelení

   3)     Zahříváme 5 minut do výstupu par, doplňujeme barvivo

   4)     Opláchneme vodou

   5)     Dobarvíme kontrastním barvivem - safraninem nebo kongo – červení (převrstvením 5 min)

   6)     Opláchnout vodou, usušit, pozorujeme pod imerzí

   Pozorování:   Spory jsou zelené, ostatní buněčný obsah červený.

B.      Wirtzovo – Conklinovo barvení

   1)     Fixovaný preparát převrstvíme malachitovou zelení

   2)     Zahříváme 2-3minuty do výstupu par

   3)     Slijeme barvivo, opláchneme

   4)     Body 1-3 opakujeme 3x

   5)     Dobarvíme zředěným karbolfuchsinem 3 minuty

   6)     Opláchneme vodou, usušíme, pozorujeme pod imerzí

   

  C.       Möllerova metoda

   1)     Fixovaný preparát moříme (5 %) kyselinou chromovou 10 minut

   2)     Opláchneme vodou

   3)     Převrstvíme karbolfuchsinem, zahříváme nad mírným plamenem

        2 minuty do výstupu par, barvivo nesmí vyschnout

   4)     Po zchladnutí opláchnout vodou

   5)     Odbarvit 5% kyselinou sírovou 10 – 20s

   6)     Opláchnout vodou

   7)     Odbarvené vegetativní buňky dobarvit methylenovou modří 4 – 6 minut

   8)     Opláchnout vodou

   9)     Usušit, pozorujeme pod imerzí

   Pozorování:  Spory jsou červené, zbytek buňky modrý.

   

D.         Ziehl – Neelsenovo barvení

   1)     0,5 ml husté suspenze buněk smícháme s 0,5 ml Ziehl-Neelsenova karbolfuchsinu a 20
   minut zahříváme na vařící vodní lázni

   2)     1 malou kapku smíchat s 1 kapkou nigrosinu na podložním sklíčku

   3)     po uschnutí pozorujeme pod imerzí

   

   

   

   

     Bacillus megaterium

    Bacillus anthracis                                
                                                      
                                                      

     

     Bacillus sphaericus

   

   

   Bacillus cereus

     Clostridium tetani

     Clostridium botulinum

    TEM, Bacillus stearothermophilus

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   

   Zdroje: Skripta Mikrobiologické praktikum

   Obrázky: Miniatlas mikroorganismů a dále (včetně animací):

   

   http://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/lecguide/unit1/prostruct/spore.html