9. Fotometrie

   

   

   1. Vypočítejte hodnoty absorbance pro následující hodnoty prošlého světla v %
                        (tj. transmitanci T = I/I[0] . 100%):

   

   a) 95               b) 88               c) 71                d) 50               e)
   17,5            f) 1,0

   

   

   2. Isolujete látku A (mol.abs.koeficienty ε = 5248 při 260 a 3150 při 280 nm) pomocí
   reagentu B (ε  = 311 při 260 a 350 při 280nm). Výsledný preparát má A[260] = 2,50 a
   A[280] = 2,00.

   

   Jaká je koncentrace A?

   

   

   4. Roztok  sloučeniny  A  má A[260] = 0,45 a A[450]= 0,03, roztok  sloučeniny  B má A[260]=
   0,04 a  A[450]= 0,81. Směs 2 ml roztoku  A  +  1  ml  roztoku B má A[260] = 0,30 a A[450] =
   0,46.

   

   Existuje  interakce  mezi  A  a  B?  Jaký předpoklad musí být splněn?

   

   

   3. 3 ml směsi NAD^+ a NADH v 1 cm kyvetě měly A[340] = 0,207 a A[260] = 0,900. Vypočtěte
   molární koncentrace NAD^+ a NADH, jsou-li hodnoty ε[340] = 6,22 . 10^3 pro NADH a 0 pro
   NAD^+, ε[260] = 18 . 10^3 pro obě formy.

   

   

   

   5. Spektrum bílkoviny bylo snímáno diferenčně v přítomnosti 20% sacharosy a 20%
   dimetylsulfoxidu. V sacharose byla absorbance nulová pro všechny vlnové délky, po zahřátí
   vzorku na 60 ^oC se objevilo maximum odpovídající Try. Jeho výška odpovídala koncentraci 8 mol
   Try / mol bílkoviny. V dimetylsulfoxidu bylo získáno spektrum typické pro Try, po zahřátí na
   60 ^oC se výška píku zdvojnásobila. Co lze řící o struktuře bílkoviny?

   

   

   

   6. Titrujeme  bílkovinu  louhem.  A[295]  roste s pH, nejostřejší vzestup je při pH 9,6. Při
   pH 11,7 je pozorován druhý vzestup, jeho výška je 1/3 prvního. Bílkovina obsahuje v molekule 8
   zbytků Tyr. Co lze říci o struktuře?

   

   

   

   7. Vyisolovali  jste DNA z E. coli. Průměrné zastoupení párů GC  je 50%. Denaturační křivka
   není hladká, má dva stupně při 80 a 88 ^oC. Výška prvního je 1/4 druhého. Jaké je
   pravděpodobné vysvětlení?