Vliv pH a teploty na spektrální vlastnosti fluorescenčních sond V tomto experimentuje ukázán vliv pH na fluorescenci a absorpci fluorescenční značky fluoresceinu rozpuštěné ve stejné koncentraci v roztocích o různém pH. Je rovněž demonstrován vliv teploty na intenzitu fluorescence. Materiál • fluorescein - NIST-traceable standard - 50 uM (Molecular Probes, Invitrogen) • mikrokyveta • pufr 5 (20 mM MES, pH 5.5) • pufr 7 (50 mM fosfát sodný, pH 7.0) • spektrofluorometr vybavený kryostatem Postup Připravte vzorky fluoresceinu lOOOx naředěním roztoku NIST standardu jeho pndáním 1 uL do 999 uL roztoku pufru 5 a pufru 7. Změřte excitační spektra vzorků při l(em) = 515 nm Změřte emisní spektra vzorků při X(ex) = 488 nm Změřte spektra při 20°C , 25°C a při 30°C. Wavelength (nm) pH ujo Ex - 4flB nm Wavel&ngth (nm) Obr. 1. Vliv pH na absorpční a fluorescenční emisní spektrum fluoresceinu. Výsledky Při změně pufru z pH 7 na pH 5 a při zvýšení teploty dochází ke snížení intenzity fluorescence fluoresceinu.