Koncepce předmětu spec. imunolog. metod Bi 9250C, zimní semestr 2009 Časový rozpis blokového cvičení z předmětu Speciální cvičení z imunologie 15 studentů, 2h/2kredity Pomůcky s sebou: Přezůvky a plášť, protokoly, svačina V praktickém cvičení se budeme zabývat a) jednak testy sledující aktivitu IS bezobratlých b) obratlovců Metody: Odběr a zpracování krve, hemolymfy, ELISA – stanovení přítomnosti protilátek proti B.b.s.l. – Borrelia afzelii, Test aktivity lymfocytů, rychlá imunochromatografická metoda stanovení RSV viru – ukázka, rychlá imunochromatografická metoda stanovení HIV viru – individuální stanovení, Pozorování buněk hemolymfy (hemocyty hmyzu), Test aktivity fagocytózy pomocí MSHP částic u hemocytů hmyzu, Průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka – nepřímá hemaglutinace (HIT) Termín: 3.2-6.2. 09 od 9hod út: odběr krve z prstu, úprava destiček na ELISA, příprava Ag, RSV test a v průběhu dne seznámení s e s obsahem cvičení st: zpracování séra (do ledničky), dokončení přípravy destiček a imunochromatografický RSV test, HI V test čt: test aktivity lymfocytů (izolace lymfocytů a měření ATP), průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka (HIT) pá: ELISA Úterý 9.00 Odběr krve z prstu Příprava destiček.- Et OH, promývání destiček, zjišťování konc. antigenu, ředění Ag; imunochromatog rafický RSV test - stěr z nosu, samotný test, HIV test Středa 9.00 odstranění Ag a promytí, napipetování 100μl vazeb. roztoku s kaseinem, inkubace s kaseinem, promytí destiček; odběr hemolymfy a sledování fagocytárních schopností hemolymfy pomocí MSHP částic Čtvrtek 9.00 test aktivity lymfocytů, průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka (HIT) stanovení krevních Ag ze slin Pátek 9.00 samotná ELISA ředění sér, rozložení vzorků na destičku, příprava zředěných sér: inkubace destičky se séry (naředit konjugát), promytí destičky, nanesení konjugátu, inkubace s konjugátem (nachystat substr. roztok s OPD), promytí a nanesení substr. roztoku, inkubace se substrátem, měření na ELISA-readeru Přehled metodik: Odběr a zpracování krve, ELISA - stanovení přítomnosti protilátek proti B.b.s.l. Test aktivity lymfocytů Rychlá imunochromatografická metoda stanovení RSV viru - individuální stanovení Rychlá imunochromatografická metoda stanovení HIV viru - individuální stanovení Pozorování buněk hemolymfy (hemocyty hmyzu), barvení buněk Test aktivity fagocytózy pomocí MSHP částic u fagocytů hmyzu, barvení buněk Průkaz přítomnosti antigenů erytrocytů ve slinách člověka (HIT)