7-Centrifugace


1.      Co bude mít větší s      a) tuhá nebo ohebná tyčinka?

b) plná nebo dutá koule?



2.      Popište rovnici separace 2 látek o hodnotách s[1] a s[2] sedimentujících v jedné kyvetě!



3.      Makromolekuly sedimentují ve vodě při 20 ^0C, byla zjištěna hodnota


s^0[20,WP]  = 14,2 S, D = 5,82 . 10^-10 m^2.s^-1 a   = 0,74 . 10^-3 m^3 . kg^-1.


Vypočtěte M[r]!



4. Předpokládáte, že reagens X způsobí kovalentní vazbu mezi řetězci DNA. Jak to potvrdíte pomocí
centrifugace?



5. Reagens Y způsobilo, že s vysoce kompaktní bílkoviny kleslo o ca 40%. Jaký účinek Y na bílkovinu
lze předpokládat, jestliže je pík při sedimentaci a) užší, b) širší?



6. Bílkovina dala při sedimentaci ve vodě jeden pík odpovídající M[r] 50 000. V 6 M guanidinium
chloridu se objevily 2 píky odpovídající 5000 a 15 000. Plocha pomalejšího píku je 2/3 rychlejšího.
Jaké závěry lze učinit?



7. DNA při centrifugaci v CsCl dala jeden pík. Po působení etidium bromidu dala 2 píky, plocha
rychlejšího byla dvojnásobná oproti pomalejšímu. Co z toho lze vyvodit?




8. Zjišťujeme s suprahelikální DNA v závislosti na koncentraci etidium bromidu. Hodnota s nejprve
klesá, po dosažení minima pak roste. Co se děje s DNA?




9. Lipoprotein je centrifugován v 1 M NaCl. Pík se objevil u dna a pohyboval se k hladině.
Vysvětlete!