9-Fotometrie


1. Vypočítejte hodnty absorbance pro následující hodnoty prošlého světla v % (tj. transmitanci T =
I/I[0] . 100%):

a) 95       b) 88       c) 71       d) 50       e) 17,5           f) 1,0



2. Isolujete látku A (mol.abs.koeficienty 5248 při 260 a 3150 při 280 nm) pomocí reagentu B (311
při 260 a 350 při 280nm). Výsledný preparát má A[260] = 2,50 a A[280] = 2,00. Jaká je koncentrace
A?


4. Roztok  sloučeniny  A  má A[260] = 0,45 a A[450]= 0,03, roztok  sloučeniny  B má A[260]= 0,04 a
A[450]= 0,81. Směs 2 ml roztoku  A  +  1  ml  roztoku B má A[260 ]= 0,30 a A[450 ]= 0,46.

Existuje  interakce  mezi  A  a  B?  Jaký předpoklad musí být splněn?


3. 3 ml směsi NAD^+ a NADH v 1 cm kyvetě měly A[340] = 0,207 a A[260] = 0,900. Vypočtěte molární
koncentrace NAD^+ a NADH, jsou-li hodnoty ε[340] = 6,22 . 10^3 pro NADH a 0 pro NAD^+, ε[260] = 18
. 10^3 pro obě formy.


5. Spektrum bílkoviny bylo snímáno diferenčně v přítomnosti 20% sacharosy a 20% dimetylsulfoxidu.
V sacharose byla absorbance nulová pro všechny vlnové délky, po zahřátí vzorku na 60 ^oC se
objevilo maximum odpovídající Try. Jeho výška odpovídala koncentraci 8 mol Try / mol bílkoviny.
V dimetylsulfoxidu bylo získáno spektrum typické pro Try, po zahřátí na 60 ^oC se výška píku
zdvojnásobila. Co lze řící o struktuře bílkoviny?


6. Titrujeme  bílkovinu  louhem.  A[295]  roste s pH, nejostřejší vzestup je při pH 9,6. Při pH
11,7 je pozorován druhý vzestup,jeho výška je 1/3 prvního. Bílkovina obsahuje v molekule 8 zbytků
Tyr. Co lze říci o struktuře?


7. Vyisolovali  jste DNA z E. coli. Průměrné zastoupení párů GC  je 50%. Denaturační křivka není
hladká, má dva stupně při 80 a 88 ^oC. Výška prvního je 1/4 druhého. Jaké je pravděpodobné
vysvětlení?