Příprava trvalých histologických preparátů:


1. Odběr: biopsie, tkáňový bloček max. 1 cm^3


2. Fixace – podstata – denaturace proteinů, tak aby struktura tkáně zůstala zachována. Bloček se
vloží do fixačního činidla co nejdřív po odběru, fixační tekutina musí mít ke tkáni přístup ze
všech stran a má ji být asi 20x více než je objem bločku. Doba fixace závisí na teplotě, velikosti
bločku, vlastnostech tkáně, typu fixačního činidla. Nejčastěji používaná fixační činidla:
formaldehyd, etylalkohol, ledová kyselina octová, kyselina trichloroctová


3. Vypírání – voda nebo alkohol, cílem je odstranit zbytky fixačního činidla a tím zamezit
pokračování fixace


4. Zalévání – cílem je zalít bloček do pevné a přitom krájitelné hmoty, nejčastěji parafin, nebo
celoidin, které jsou ve vodě nerozpustné nebo želatina, která je ve vodě rozpustná. V případě těch
nerozpustných, což je častější se musí tkáň nejprve zbavit vody a potom zalévat do média. Pokud by
voda v tkáni zůstala, nemohlo by zalévací médium tkáň prostoupit.

Pro příklad uvedeme postup při zalévání do parafinu, tedy ve vodě nerozpustného média. Je nutné
provést:

- Odvodnění se provádí tzv. vzestupnou alkoholovou řadou, kdy se bloček postupně ponořuje do 50%,
80% a absolutního alkoholu.

- Prosycení tkáně benzenem (benzen se mísí s alkoholem a současně rozpouští parafin)

- Prosycení tkáně parafinem a vlastní zalití do parafinu


5. Krájení zalitých tkáňových bločků – mikrotomy sáňkové nebo rotační, získáme řezy, ty umístíme na
podložní sklíčko a všechny další procedury se už provádí na řeyu , který je pevně přilnutý na
podložní sklíčko. Jsou to tyto kroky:


6. Odparfinování provádí se podstatě v opačném sledu jako zalévání do parafinu. Tedy parafin se
rozpustí xylenem a potom sestupnou alkoholovou řadou preparát vlastně zavodníme. To je nutné z toho
důvodu, že barviva používaná v následujícím kroku v naprosté většině vodné roztoky.


7. Barvení: většina postupů je empiricky vypracovaných.  Příklad: barvení hematoxylin – eozin.
Eozin je kyselé barvivo, barví cytoplasmu, hematoxylin je bazický, barví jádro. Další příklady
barvení: Azan, impregnace solemi stříbra apod.


8. Uzavírání obarvených řezů: řez se  „montuje“ mezi podložní a krycí sklíčko. Procedura barvení
probíhala na podložním sklíčku, uzavírání tedy znamená, že se nahoru přiloží   krycí sklíčko a
upevní nejčastěji pomocí kanadského balzámu. Předtím je nutno řez odvodnit, protože kanadský balzám
se nemísí s vodou a barvení probíhalo ve vodném prostředí, potom projasnit xylenem a uzavřít do
kanadského balzámu.