Obecná zoologie - cvičení Šárka Masová masova@sci.muni.cz Kotlářská 2, bud. 8, podkroví podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 1 Osnova cvičení 1. týden 21.-25.9. • 2. týden 28.-2. 10. 3. týden 5.-9. 10. 4. týden 12.-16. 10. 5. týden 19.-23. 10. 6. týden 26-30. 10. 7. týden 2. 11.-6. 11. 8. týden 9.-13. 11. 9. týden 16.-20. 11. 10. týden 23.-27. 11. 11. týden 30. 11.-4. 12 12. týden 7.-11. 12. 13. týden 14.-18. 12. úvod, bezpečnost, mikroskop morfologie živočišných buněk buněčný cyklus, mitóza, modifikace mitózy individuální studium, cvičení odpadají preparace slinných žláz larev pakomára, meioza, spermatogeneze, oogeneze, video: meioza epitely jednovrstevné epitely mnohovrstevné, pozorování epiteliálních buněk sliznice, y ideo: epitely pojiva výplňová, video: pojiva pojiva oporná tkáně svalové a nervové, video: svaly, nervy pojiva trofická - krevní diferenciál odevzdání chybějících protokolů pitva myši, vracení chybějících protokolů zápočtová písemka podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 2 Protokoly • Uvádět: - Jméno - Datum (případně i seminární skupinu) - Téma cvičení - Úvod: stručné poznámky z teoretického výkladu - Obrázky: název preparátu, zvětšení, popis dostatečně veliké (max 2 nákresy na A4) - Závěr (je-li požadován) podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 3 Obecná zoologie - cvičení • Cytologie • Histologie • Organologie • Cíle histologie: - porozumět struktuře tkáně na úrovních, které nelze pozorovat pouhým okem -využití mikroskopie - porozumět vztahu mezi strukturou a funkcí tkáně - získat základ: obrazy zdravé tkáně —► využití v patologii (abnormality, defekty) podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 4 Histologické metody • Histologie - z řečniny: histos = tkáň, logos = nauka) • Příprava řezů tkání z orgánů • Mikroskopie - analýza tkáně pomocí světelné a elektronové mikroskopie • Zpracování tkání pro mikroskopii (krájení, barvení) • Interpretace výsedků - výhody / nevýhody a omezení jednotlivých metod podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 5 Zpracování tkání pro mikroskopii L ! Omezení —► artefakty Řezy -► ! 2D představa 3D struktur —► série řezů (rekonstrukce) podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 6 Zpracování tkání SM ■ Fixace (ehem., fyz.) • Odvodnění (ethanol) ■ Projasnění (xylen) ■ Prosycení (xylen/parafin) ■ Zalití (parafín) ■ Krájení (mikrotom) ■ Montování (na podlož, sklo) • Od parafin ova n í • Rehydratace ■ Barvení • Odvodnění ■ Xylen • Kanadský balzám ■ Světelná mikroskopie jro mikroskopii IL EM • Fixace (ehem., fyz.) • Odvodnění (ethanol) • Projasnění (propylenoxid) • Prosycení (prop./pryskyřice) • Zalití (pryskyřice) • Krájení (ultramikrotom) • Montování (Cu síťka) • Barvení, kontastování • TEM -Fixace •Odvodnění (ethanol) •Vysoušení (kritický bod) •Montování (držák) •Pokovení •SEM podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 7 Mikroskop Kolečko posuvu v ose Y podzim 2009 Obecná zoologie - -části Objektiv - zajišťuje zvětšení a rozlišení zvětšení numerická apertura (NA) vlnová délka světla index lomu prostředí úhel svíraný paprsky vycház. z objektu a zachyc. objektivem NA - charakterizuje společně s vlnovou délkou rozlišovací schopnost = RS (čím blíže k 1, tím RS větší) RS - vzdálenost dvou bodů, které mikroskop zobrazí jako dva samostatné body RS lze zvýšit A) snížením A - využití vlastností elektronů (elektronová mikroskopie) B) zvyšováním n - použití imerzního oleje podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 9 • !• Zvětšení Objektiv s korekcí na nekonečno Barevný pruh ^YMPl*! PlanC 40X/O.65 oo/o. n Označení objektivu Numerická apertura Tloušťka krycího sklíčka E £ Okular 10X(ČP20) CD fi ctí E o ,__, E >C/) 2 Optická charakteristi CD Numerická apertura Pracovní vzdálenost [ Tloušťka kry sklíčka [mm 2, CD >cň Tši O N -CD > O CD Ü Hloubka ost Dum] CD O Q. -CD C O N co a: E -co c N O Q. PlanC 4X 0,10 22,00 — 3,36 40X 175,00 5,0 Pian Achromat 10X 0,25 10,50 - 1,34 100X 28,00 2,0 (CP 22) 40X 0,65 0,56 0,17 0,52 400X 3,04 0,5 100X 11,25 0,13 - 0,27 1000X 0,69 0,2 (přídavný) podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 10 30 * Imerzní tekutina se kápne (1 kapka) na krycí sklíčko preparátu a objektiv se omočí v této kapce v průběhu mikroskopování musí být objektiv stále spojen imerzní tekutinou s krycím sklíčkem po ukončení mikroskopování se musí objektiv očistit! - ether + alkohol (7:3) Imerzní objektivy mají na svém povrchu vyznačeny zkratky imerzních tekutin, které se smí používat. Imerzní tekutina se nesmí používat s objektivy, které nejsou imerzní!!! podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 11 Slovníček pojmů Pracovní vzdálenost: Numerická apertura: Rozlišovací schopnost: Hloubka ostrosti Číslo pole: Průměr zorného pole: Celkové zvětšení: Vzdálenost mezi preparátem a nejnižším bodem objektivu. Numerická apertura je číselná hodnota, kterou lze přirovnat k relativní apertuře (číslu f) objektivů fotoaparátů. S rostoucí numerickou aperturou roste i rozlišovací schopnost objektivu. Schopnost rozlišit dva body, tzn. že vyjadřuje minimální vzdálenost dvou objektů tak, aby byly vnímány jako dva jednotlivé objekty. Hloubka obrazu, v níž bude zaostřený obraz rovnoměrně ostrý. Hloubka ostrosti se zvětšuje se zavíráním aperturní clony. S rostoucí numerickou aperturou objektivu hloubka ostrosti klesá. Číselná hodnota, která ovlivňuje velikost zorného pole. Skutečný průměr pozorovaného pole v milimetrech. Součin zvětšení objektivu a zvětšení okuláru. podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 12 Postup při pozorování ve světlém poli I, 1. Zkontrolujeme čistotu všech optických částí mikroskopu. 2. Do světelné dráhy zařadíme objektiv s nejmenším zvětšením (4x). 3. Prohlédneme preparát, umístíme jej na stolek, krycím sklem vzhůru. 4. Otáčením koleček posuvu v osách x a y posuneme preparát do světelné dráhy. 5. Přepneme hlavní vypínač do polohy „I" (zapnuto) a nastavíme jas kolečkem na ovládání intenzity světla. podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 13 Postup při pozorování ve světlém poli II 6. Makrošroubem umístíme stoleček s preparátem do nejvyšší polohy. 7. Nastavíme vhodnou vzdálenost (rozteč) okulárů na vlastní oči - až se nám obraz spojí. 8. Otáčením šrouby makro a mikroposuvu zaostříme na preparát. 9. Lze nastavit dioptrickou korekci na levém okuláru. 10. Aperturní (hodnota: 70-80% NA) a polní clonou lze regulovat množství světla. Zásada! Postupujeme od celkového obrazu k detailům. podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 14 Informační zdroje http://www.iolympus.cz/mikroskopy/navody/CX31.pdf Doporučené prohlubující předměty BM050 Biologická technika BM301 Botanická mikrotechnika BÍ2302 Zoologická mikrotechnika BÍ3010 Elektronová mikroskopie podzim 2009 Obecná zoologie - cvičení 15