Úvod ke cvičením

                                           Mikrobiologie

                                            Podzim 2009

                                  Cytologie a morfologie bakterií

                                          Sylabus cvičení

•           Příprava a sterilizace živných medií

•           Očkování a uchovávání mikroorganismů

•           Makroskopické a mikroskopické pozorování

•           Počítání životaschopných bakterií - sporulace

•           Izolace půdních mikroorganismů

•           Mikrobiologický rozbor vody

•           Barvení a pozorování pouzder a spor

•           Kvasinky

•           Bakterie a jejich citlivost na antibiotika

•           Základní biochemické testy





                                            Morfologie

•           Buňky

•           Charakteristických shluků buněk

•           Extracelulárních útvarů (spory,

   konidie, sporangia, pouzdra..)

•           Bakteriální kolonie





                                         Morfologie buňky

•           PREPARÁT

   - co chceme vidět? – podle toho preparát a typ mikroskopie

   tvar buňky – fázový kontrast, barvený fixovaný prep.











  pohyb buňky – fázový kontrast, fluorescence

  barvené struktury – pomáhají identifikaci (PHB, síra

  typ buněčné stěny – Gramovo a acidorezistentní b.



                                   U jednoho bakteriálního rodu
                                  různý vzhled char. tvaru buňky!

•           Př: tyčky bacilů                •Haemophilus

                                    Posuzujeme-li vzhled buňky
                        určitého bakteriálního druhu, je třeba si uvědomit:

1) Prochází tento druh růstovými cykly?

- v každém z nich má pak buňka jinou morfologii!

    Př: Chlamydia Bdellovibrio, Streptomyces, Caulobacter, myxobakterie….

Mění se nejen vzhled buňky,

ale buňka v cyklech prochází

typickou změnou vnitřních

struktur.



                                    Morfologie buňky vprostřed
                                          buněčného cyklu



2) Vytváří posuzovaný druh endospory?

- v preparátu pak mohou měnit tvar buněk!

                                      Endospory vs. exospory



3) Stárnutím mění buňky tvar

4) Závislost tvaru buňky na vnějším prostředí

-           živiny, tlak, osmolarita…

5) pleomorfní buňky – př. rody Mycobacterium, Corynebacterium, Haemophillus, Mycoplasma



                            Morfologie charakteristických shluků buněk

•          typické shluky napomáhají identifikaci

                                     Morfologie bakt. kolonií



•             potřeba zvážit typ media, ne kterém kolonie hodnotíme!

        kultivace - zda vůbec kultivovatelné?? - sledování typu kolonií



Př: sledování morfologie kolonií

                   – univerzální media, jiný vhled na

                      selektivním – zda vůbec růst či ne? barevná reakce?)

                         S-, R- a M-formy

                         sledování pohybu terasovité kolonie (Př: Proteus)









                                       Kontaminace na misce!

                                             Cytologie

                               BAKTERIÁLNÍ BUŇKA   x  vs. eukaryotní

                        •           nutno porovnat pro pochopení fyziologie





                                  Zvláštnosti prokaryotické buňky

•             živý, otevřený systém schopný regulace a autoreprodukce

•             jádro neodděleno od CPL membránou, větš. kruhová (i lineární) DNA

•             haploidní buňky (1 alela) množící se nepohlavně

•             bez buněčných organel, jediná membrána je cytoplasmatická

•             ribosomy se liší od ribosomů eukaryotních buněk – menší, volně v CPL vyjma Archea:

5S, 16S a 23S rRNA

      translace začíná N-formylmethioninem

       geny pro RNA bez intronů

specifické struktury a vlastnosti bakt. buňky:

       peptidoglykan (až na mykoplasmata)

       steroly v membránách zcela výjimečně

       bičík – globul. bílk. flagelin, pohyb rotací

       anaerobiosa, schopnost vázat N

              tvorba kyseliny PHB (zásob.l.)

       pokud fotosyntéza - anoxigenní

                                  Př: klasifikace: rod Aeromonas

•           Aeromonas

•           Aeromonas hydrophila

•           Aeromonas hydrophila ssp. hydrophila

•           Aeromonas hydrophila ssp. hydrophila CCM 7232 ^T

•           Aeromonas hydrophila ssp. hydrophila CCM 1271

                                                                   CCM 1275







                                 Česká sbírka mikroorganismů (CCM)

•           uchovává kultury bakterií a hub pro

      - základní a aplikovaný výzkum

      - průmyslové využití, biotechnologii

      - referenční kmeny pro klinické laboratoře

        humánního a veterinárního zaměření

      - výuku

•           2 500 kmenů bakterií (~ 280 rodů, 930 druhů)

•           600 kmenů vláknitých hub (~ 200 rodů, 560 druhů)

                                     Bezpečnost a zásady práce