Mikroskopické techniky a její
praktické využití
Eva Bártová
Biofyzikální ústav Akademie věd ČR
Brno
Princip fluorescenčního mikroskopu
Excitační filtr,
(nastaven na modrou
tj. 450-490 nm ) Bariérový filtr,
(nastaven na zelenou
tj. 520-560 nm )
Dichroické zrcadlo,
odráží světlo pod 510 nm
a propouští nad 510 nm
Zdroj
světla
Okulár
ObjektivPreparát
LSCM mikroskop
laser
vzorek
skenovací
zrcadla
pinhole detektor
Tandem scanning microscopes
based on Nipkow disk
Source of light
Sample
CCD
rotation
pinholes in the disk
Dichroic mirror
Ar/Kr Laser Innova 70 (Coherent)
Laser head
Internal aperture
Light open/closed
AOTF
Fiber coupling
Rear view on the laser
Screws adjusting rear mirror
Inkubační komůrky pro přímý mikroskop
Termistors in short tubes on
the side of the chamber
Partition with opening
on the bottom of the chamber
(for experiments under upright
microscope)
Cover glass 24x50 mm
Glass tubes bent under the upper glass (to enable CO2
to flow above medium in the part II of the chamber)
Part I ­ cells can be grown
on both upper and lower
sides of the chamber; this
part is filled fully with medium
Part II ­ medium reaches
under the glass tubes; cells
are not grown here
3D-FISH a konfokální mikroskopie
Maximální obraz
Všech řezů
Galerie optických řezů
3D reconstrukce CT
Weierich et al., (2003) in press
Segmentace FISH signálů
R 1 G 1 R 5 G 5 R 9 G 9
R 2 G 2 R 6 G 6 R 10 G 10
R 3 G 3 R 7 G 7 R 11 G 11
R 4 G 4 R 8 G 8 R max G max
Automatická analýza obrazuAutomatická analýza obrazu
3D obrázek
Comparative genome hybridization
CGH onCGH on metaphasemetaphase spreadsspreads
Transmisní Elektronový Mikroskop (TEM)
Skenovací (Rastrovací) Elektronový Mikroskop