Cvičení 1

                          9.10. (8:00 – 12:00h) a 16.10. (8:00 – 12:00h)


Téma: 1) Úvod do mikroskopování

–        v jasném poli (barvené preparáty)

–        fázový kontrast (nativní preparáty)

–        Nomarského kontrast (nativní preparáty)



            2) Morfologie buňky

            - Gramovo a negativní barvení

            - jednoduché barvení buněčné stěny (krystalová violeť)

            - barvení buněčné stěny Chanceovou metodou (fixace, převrstvení 1% krystalovou violetí,
působení 2 minuty, oplach vodou, osušit, převrstvení 2% kongo červení, 30 – 60s, osušit)

             - negativni barvení nigrosinem


           3) Makrofoto kolonií


Použité bakteriální kmeny – od každého jedna miska:


I) V rámci jednoho rodu, G+ tyčky různé tvary, bacily prosim 48h kultivace se sporami:


Bacillus thuringiensis CCM 19  (G+ tyčky)

Bacillus sphaericus CCM 1615 (G+ tyčky)

Bacillus mycoides CCM 145 (G+ tyčky)

Bacillus cereus CCM 2010 (G+ tyčky)

Bacillus megaterium CCM 2007 (G+ tyčky)

Bacillus subtilis CCM 2216 (G+ tyčky)

Lactobacillus curvatus CCM 7558T – zakřivené

Lactobacillus rhamnosus CCM 1825T – typické tyčky

Lactobacillus casei subsp. casei CCM 7088T - zakřivené

Lactobacillus brevis CCM 3805T – krátké tyčky

Lb. delbrueckii ssp. bulgaricus CCM 7190

Lb. johnsonii CCM 4384

Lb. ganesi CCM 7009

Lb. jensenii CCM 7560


Laktobacily – z tekutého media, barvený i nativní preparát – buňky na sklíčko přenášíme pasteurkou
(s balonkem) (nepřidává se kapka vody)


II) větvení buněk

Nocardoides – sklíčková kultura i miska??

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus CCM 7190T – pro tento pokus se bude kultivovat ve
vysokém sloupci M6 media

Streptomyces griseus ssp. griseus CCM 2386 – vlákna, G+

Nocardia carnea CCM 2756 –


III) Archaea:

Haloarcula hispanica CCM 3601T

Haloferax mediterranei CCM 3361T


IV) tyčka - kok


Arthrobacter crystallopoietes CCM 2386 (G+ tyčky a koky) – z kultivace 12h, 19h a 24h



V) eukaryota

Saccharomyces cerevisiae – kvasinka, eukaryotní buňka, pro fázový kontrast a Grama



VI) vliv media na morfologii buňky, zároveň nácvik barvení z tekutého media – pozor na oplach ze
sklíčka!!

Streptococcus mutans CCM 7409T z krevního agaru a z tekutého media

- barvení 1 rodu (jednou tyčky – z tekutého, jednou koky – z KA)


VII) G- tyčky

Serratia marcescens CCM 303(G- tyčka)


VIII) G+ koky nebo krátké tyčky

Azotobacter vinelandii CCM 289 (slizovité kolonie, pouzdra)

Leuconostoc mesenteroides CCM 1803 (slizovité kolonie, pouzdra)

Sporosarcina ureae CCM 860 – G+ tetrády

Micrococcus luteus CCM 169 -  G+ koky






Všímáme si: tvar buněk, vyklenutí (způsobeno sporami?? vyklenují centrálně  či terminálně?) poměru
šířky a délky buněk

Co ovlivňuje vzhled buněk v preparátu:  stáří kultury?? živná půda?? zvětšení??