Cvičení 4

                         20.11. (10:00 – 13:00h) a 27.11. (8:00 – 12:00h)


Téma: pohyb buněk



Salmonella typhimurium,

Chi Aizawa, Teikyo University

Náplň cvičení:


-         porovnat pohyb buněk Microccocus luteus - Brownův pohyb (nativní preparát)

-         barvení bičíků

-         očkování do polotekutého media


každý týden 15 misek polotekutého media, barvičky na bičíky


Mikroorganismy – od každého prosím 2 misky, mikrokok stačí jedna:

Bacillus cereus CCM 2010

P. fluorescens CCM 2115T

Proteus vulgaris CCM 1799

E. coli CCM 3954

Sphaerotilus natans CCM 2349

Micrococcus luteus CCM 169 – pro srovnání nativního preparátu



POZOROVÁNÍ BIČÍKů


Pozorování pohybu bičíku

- visutá kapka

        nativní preparát

- kapka suspenze buněk v mediu na podložní sklo, nepřekrývat krycí, pozorování objektivem 20,
nezanořovat!! Nomarského kontrast. Pro vitalitu buněk je důležitý dostatek kyslíku (citlivější
buňky se hýbou jen nahoře). Je nutno opatrně proostřovat na horní část kapky – dostatek O[2].


Barvení bičíků:

Závisí na způsobu kultivace. Kultivace buněk vhodná v tekutém mediu.

Staré buňky odhazují bičíky.


         Fixace, speciální barvicí metody pro světelný mikroskop. Barvička obsahuje

         mořidlo tanin, které se obalí kolem bičíku, jeho průměr se znásobí a zviditelní.

         Postup:

a)      opatrně připravíme nativní preparát na odmaštěné podložní sklíčko

b)      opatrně překryjeme krycím sklem

c)      vedle krycího sklíčka kapka barvičky

d)      prosajeme filtračním papírem

e)      pozorování pod imerzí

Barvička na barvení bičíků: roztok I (10 dílů) a II (1díl), zamražený

Roztok I: 10ml 5% vod.roztoku fenolu, 2g taninu, 10ml Kal (SO[4])[2] . 12 H[2]O

Roztok II: nasycený roztok krystalové violeti (12g) v ethanolu (10ml, 96%)