Skupina 1 Skupina 2 Skupina 3
Day 1 Izolace celkové RNA
U937 / U937-TPA
Náhradní: RNA ze zdravé
tkáně vs. tumor
Změření c, A, spektra
RT ­ RH
Izolace celkové RNA
Buffy coat
Náhradní: RNA ze zdravé
tkáně
Změření c, A, spektra
RT ­ odT
Izolace mRNA
U937 / U937-TPA
Změření c, A, spektra
RT ­ RH
Day 2 Kalibrační křivky, výpočet
účinnosti PCR
Stanovení optimální
koncentrace primerů GAPDH
Denaturační křivky
Kalibrační křivky, výpočet
účinnosti PCR
Day 3 Porovnání exprese ve
zdravé tkáni vs. tumor
pomocí
- nenormalizované exprese
- normalizované exprese
(ddCt)
- zahrnutím účinnosti PCR
Stanovení vlivu ethanolu, SDS
a EDTA na efektivitu PCR
PCR s přídavkem ethanolu,
SDS a EDTA
Kalibrační křivky, výpočet
účinnosti PCR
Porovnání exprese cycD1 v
U937/U937 TPA pomocí
- nenormalizované exprese
- normalizované exprese
(ddCt)
- zahrnutím účinnosti PCR