Mikroskopické techniky a její
praktické využití
Eva Bártová
Biofyzikální ústav Akademie věd ČR
Brno
Dendra2 photo-conversion
Dendra2 is an improved version of a green-to-red photoswitchable
fluorescent protein Dendra, derived from octocoral
Dendronephthya sp. [Gurskaya et al., 2006].
Princip fluorescenčního mikroskopu
Excitační filtr,
(nastaven na modrou
tj. 450-490 nm ) Bariérový filtr,
(nastaven na zelenou
tj. 520-560 nm )
Dichroické zrcadlo,
odráží světlo pod 510 nm
a propouští nad 510 nm
Zdroj
světla
Okulár
ObjektivPreparát
Vstupní štěrbina, dělič svazků, dichroické zrcadlo, AOTF (akusto-optický dělič svazků)
Tandem scanning microscopes
based on Nipkow disk
Source of light
Sample
CCD
rotation
pinholes in the disk
Dichroic mirror
Inkubační komůrky pro přímý mikroskop
Termistors in short tubes on
the side of the chamber
Partition with opening
on the bottom of the chamber
(for experiments under upright
microscope)
Cover glass 24x50 mm
Glass tubes bent under the upper glass (to enable CO2
to flow above medium in the part II of the chamber)
Part I – cells can be grown
on both upper and lower
sides of the chamber; this
part is filled fully with medium
Part II – medium reaches
under the glass tubes; cells
are not grown here
JMJD2b(1-424)-GFP
JMJD2b(1-424)H189A-GFP
Dynamic exchange of H2af1o and H2afx.
Wu N et al. Biol Reprod 2009;81:275-283
©2009 by Society for the Study of Reproduction
Experiments of Gabriela Galiová
Využití UV laseru 355 nm ke studiu DNA reparace
Experiments of Gabriela Galiová
Experiments of Gabriela Galiová and Lenka Stixová
FRAP in UV-damaged chromatin with accumulated BMI1 and HP1ββββ
BMI1
Experiments of Gabriela Galiová and Darya Orlova
FRAP in UV-damaged chromatin with accumulated BMI1 and HP1ββββ
Experiments of Darya Orlova
3D-FISH a konfokální mikroskopie
Maximální obraz
Všech řezů
Galerie optických řezů
3D reconstrukce CT
Weierich et al., (2003) in press
Segmentace FISH signálů
R 1 G 1 R 5 G 5 R 9 G 9
R 2 G 2 R 6 G 6 R 10 G 10
R 3 G 3 R 7 G 7 R 11 G 11
R 4 G 4 R 8 G 8 R max G max
Automatická analýza obrazuAutomatická analýza obrazu
Comparative genome hybridization
CGH onCGH on metaphasemetaphase spreadsspreads
Transmisní Elektronový Mikroskop (TEM)
Skenovací (Rastrovací) Elektronový Mikroskop
Stimulated Emission Depletion microscopy, or STED
microscopy, is a fluorescence microscopy technique that uses
the non-linear de-excitation of fluorescent dyes to overcome
the resolution limit imposed by diffraction with standard
confocal laser scanning microscopes and conventional far-field
optical microscopes.
STED SP-5 LSCM