1. protokol Anna Petříková Úvod: Ve cvičení jsem prováděla barvení Gramem a negativní barvení. Všechny postupy bylo třeba provádět pečlivě a asepticky. Preparáty jsem pozorovala s imerzí (Z 1000x). Kolonie jsem pozorovala se Z 10x. Gramovo barvení Na čisté sklíčko naneseme kulturu a vysušíme Fixujeme plamenem Převrstvíme sklíčko krystalovou violetí (60 s), slijeme a opláchneme vodou Převrstvíme Lugolovým roztokem (30 s), slijeme a oplácheme vodou Odbarvujeme etanolem (20 s), opláchneme vodou Dobarvujeme sefraninem (60 s), opláchneme vodou a osušíme Gramem jsem barvila tyto preparáty: Bacillus subtilis CCM 2216, Lactobacillus casei subsp. casei CCM 7088T, Sporosarcina ureae CCM 860, Azotobacter vineladii CCM 289, Saccharomyces cerevisiae Negativní barvení Obarví se pozadí, buňky zůstávají nezbarvené a orámované barvivem. Barvení nigrosinem: V kapce vody rozmícháme buňky a přikápneme nigrosin. Rozetřeme sklíčkem a necháme zaschnout, nefixujeme. (Bacillus subtilis CCM 2216, Lactobacillus casei subsp. casei CCM 7088T, Sporosarcina ureae CCM 860, Saccharomyces cerevisiae Barvení Kongo-červení: V kapce Kongo-červeně rozmícháme buňky a suspence se rozetře po sklíčku a nechá zaschnout. Převrstvíme HCl, slijeme a osušíme. ( Azotobacter vineladii CCM 289) Azotobacter vineladii CCM 289 Kolonie jsou lesklé, mají hladké okraje, velké, slizovité a vypouklé. Zbarveny jsou světle žlutě. Kolonie jsou staré 5 dní. Rostou na Ashbyho agaru při teplotě 30°C. DSCN2564.JPG Azotobacter vineladii CCM 289 Gramovo barvení: Buňky se zbarvily gram negativně, mají tvar kokotyček ( z důvodu pětidenní kultivace) A.vinelandii.jpg Azotobacter vineladii CCM 289 Barvení Kongo-červení: Tmavě modré pozadí, světlá pouzdra, tmavé buňky. Lze vidět pouzdra. A.vinelandii kongo.jpg pouzdra Bacillus subtilis CCM 2216 Kolonie jsou matné, mají rhizoidní okraj, drsný povrch, přerůstající. Rostou na masopeptonovém agaru při teplotě 30°C. DSCN2558.JPG Bacillus subtilis CCM 2216 Gramovo barvení: Buňky se zbarvily gram pozitivně, mají tvar tyček. Lze vidět subterminální oválné spory, které nezduřují buňku. B.subtilis.jpg spory Bacillus subtilis CCM 2216 Barvení nigrosinem: Šedé pozadí, světlé buňky. Tyčky se mohou spojovat do řetízků. B.subtilis neg.jpg Lactobacillus casei subsp. casei CCM 7088T Gramovo barvení: Buňky se zbarvily grampozitivně. Mají tvar tyček. Vyskytují se jednotlivě i v řetízcích L.casei.jpg řetízek Lactobacillus casei subsp. casei CCM 7088T Barvení nigrosinem: Šedé pozadí, světlé buňky. Jednotlivě i v řetízcích. L.casei neg.jpg Sporosarcina ureae CCM 860 Kolonie jsou lesklé, s drsným povrchem, vpouklé s hladkým okrajem. Rostou na masopeptonovém agaru pči 25°C. DSCN2562.JPG Sporosarcina.jpg Sporosarcina ureae CCM 860 Gramovo barvení: Buňky se zbarvily gram pozitivně. Mají tvar koků. Tvoří charakteristické dvojičky a čtveřičky (balíčky). dvojička Sporosarcina ureae CCM 860 Barvení nigrosinem: Šedé pozadí, světlé buňky. Charakteristické dvojičky a čtveřičky (balíčky). Sporosarcina neg.jpg Saccharomyces cerevisiae Kolonie jsou drobné, matné, kráterovité, drsné, krémové. Roste na sladinovém agaru při 25°C. DSCN2556.JPG Saccharomyces cerevisiae Gramovo barvení: Buňky se zbarvily gram pozitivně. Jsou kulovitého až elipsoidního tvaru. Sacharomycescerevisiae.jpg Saccharomyces cerevisiae Barvení nigrosinem: Tmavé pozadí, světlé buňky. Buňky jsou hodně velké. S.cereviseae neg.jpg