Cytologie a morfologie bakterií
Blok č. 1
Irena Burdíková

Použité kmeny
•Leconostoc mesenteroides CCM 1803
• (doba kultivace 48 hodin)
•Micrococcus luteus CCM 169
• (doba kultivace 48 hodin)
•Streptococcus mutans CCM7409T
• (doba kultivace 48 hodin)
•Escherichia coli CCM 3954
• (doba kultivace 24 hodin)
•Klebsiella pneumoniae CCM 4985
• (doba kultivace 24 hodin)

Gramovo barvení
•Připravíme nátěr bakteriální kultury (vhodná hustota, zachování shluků), dokonale vysušíme
•Fixujeme plamenem
•Převrstvíme krystalovou violetí
•Barvivo slijeme, preparát krátce opláchneme vodou
•Převrstvíme Lugolovým roztokem
•Barvivo slijeme, preparát krátce opláchneme vodou
•Preparát odbarvujeme etanolem 20 - 30s
•Opláchneme vodou
•Dobarvíme safraninem
•Preparát znovu opláchneme tekoucí vodou a osušíme


•Negativní barvení
•
1.Barvení nigrosinem:
•Klička kultury bakterií se suspenduje v kapce vody na
•sklíčku a přidá se kapka nigrosinu. Rozmíchá se a pomocí
•druhého krycího sklíčka rozetře. Necháme uschnout volně
•na vzduchu. Nefixujeme! Barvení spočívá v obarvení pozadí,
•buňky  zůstávají nezbarvené, jejich obrysy jsou orámovány
•barvivem. Používá se např. k mikroskopickému průkazu
•pouzder a slizů a k měření velikosti bakteriálních buněk,
•tedy v  případech, kdy nemůžeme preparát fixovat, protože
•by došlo ke změně velikosti buněk a k deformaci
•hodnocených struktur.
•
•


•2. Barvení zředěným karbolfuchsinem
•Do kapky destilované vody na podložním sklíčku
•se přenese malé množství kultury Leuconostoc
•mesenteroides CCM 1803 z MRS se sacharózou,opatrně
•se promíchá a rozetře po povrchu sklíčka. Suší se volně
•na vzduchu. Nefixovat! Suchý preparát se převrství
•karbolfuchsinem, opláchne a negativně obarví nigrosinem,
•který se kápne do rohu sklíčka a rozetře do tenké (šedé)
•vrstvy.
•

Leconostoc mesenteroides CCM 1803
•Gramovo barvení (G+ koky)
•
leuconostoc.jpg

Leuconostoc mesenteroides CCM1803
•Negativní barvení karbofuchsinem
leuconostoc_k.jpg

Leuconostoc mesenteroides CCM1803
•Makrosnímek kultury
DSCN2575.JPG

Leuconostoc mesenteroides CCM1803
•Makrosnímek kolonie
DSCN2578.JPG

Micrococcus luteus CCM 169
•Gramovo barvení (G+ koky)
•
micrococcus.jpg

Micrococcus luteus CCM 169
•Negativní barvení nigrosinem
micrococcus_n.jpg

Micrococcus luteus CCM 169
•Makrosnímek kultury
DSCN2573.JPG

Micrococcus luteus CCM 169
•Makrosnímek kolonie
DSCN2574.JPG

Streptococcus mutans CCM7409T
•Gramovo barvení (G+ koky)
•
streptococcus.jpg

Streptococcus mutans CCM7409T
•Negativní barvení nigrosinem
streptococcus_n.jpg

Streptococcus mutans CCM7409T
•Makrosnímek kultury
DSCN2579.JPG

Streptococcus mutans CCM7409T
•Makrosnímek kultury
DSCN2579.JPG

Escherichia coli CCM 3954
•Gramovo barvení (G- tyčky)
•
e.coli.jpg

Escherichia coli CCM 3954
•Negativní barvení nigrosinem
e_coli_n2.jpg

Escherichia coli CCM 3954
•Makrosnímek kultury
DSCN2571.JPG

Escherichia coli CCM 3954
•Makrosnímek kolonie
•
• - na misce nebyly jednotlivé kultury patrné

Klebsiella pneumoniae CCM 4985
•Gramovo barvení (G- tyčky)
•
klebsiella.jpg

Klebsiella pneumoniae CCM 4985
•Negativní barvení nigrosinem
klebsiella_n.jpg

Klebsiella pneumoniae CCM 4985
•Makrosnímek kultury
DSCN2569.JPG

Klebsiella pneumoniae CCM 4985
•Makrosnímek kolonie
DSCN2570.JPG