Cytologie a morfologie bakterií Zdeněk Bystřický BLOK 1: Morfologie prokaryotické buňky a morfologie kolonií Gramovo barvení •Barvíme buněčnou stěnu •Postup: –Nátěr kultury vysušen, fixován plamenem –30 s krystalová violeť > voda > 30 s Lugolův roztok > etanol, voda > 60 s safranin > voda • Azotobacter vinelandii Azotobacter_vinelandii_CCM_289_2 Azotobacter vinelandii CCM 289 Kultivace 5 dní, Ashbyho agar lesklé kolonie, okraje rovné, vystouplé, nažloutlé zbarvení G-, pleomorfní, tyčky – kokotyčky, tvoří cysty, velikost 1,5-2 μm a více Gramovo barvení Bacillus_subtilis_CCM_2216 kvas+bacilus2 Saccharomyces_cerevisiae_2 Smíšený roztěr: Gramovo barvení Sacharomyces cerevisiae Kultivace 2 dny, MEA G+, citronovitý tvar, velikost 3,7-9,7 x 2,6-6,4 μm Bacillus subtilis CCM 2216 Kultivace 2 dny, TSA G+, tyčky v řetízcích, endospory oválné nezduřující buňku, velikost 2-3 x 0,7-0,8 μm Rhizoidní okraje, matné, mírně vystouplé, bílé zbarvení, drsné Bacillus subtilis Sacharomyces cerevisiae Hladké okraje, kulaté kolonie, bělavé zbarvení, nejsou vystouplé Sporosarcinea ureae Sporosarcina_ureae_CCM_860 Sporosarcina ureae CCM 860 Kultivace 1 den, MPAN Kulovité kolonie, okraj hladký, málo vystouplé, lesklé, okrově zbarvené G+, kulovitá nebo oválná, shluky po dvou a po čtyřech, tvoří kulaté spory, velikost 1,5-2 μm Gramovo barvení L-casei Zdenekis2 L-casei Zdenekis Lactobacillus casei subs. casei CCM 7088T Kultivace 2 dny, tekuté medium G+, nesporulující tyčinky se zaoblenými konci, výskyt jednotlivě a v řetízcích, velikost 2,0-4,0 x 0,7-1,1 μm Gramovo barvení Negativní barvení •Obarvení pozadí, buňky nezbarvené: •Kongo – červeň –kapka barviva + kultura –pozorování pouzder převrsrvení HCl, oplach vodou, barvení metylenovou modří 3 min, oplach vodou •Nigrosin – 2 kapky –destilovaná voda + kultura –nigrosin –mícháme, roztěr podložním sklíčkem, usušení na vzduchu, pozorování. – azotobacter-pouzdra Azotobacter vinelandii CCM 289 – pozorování pouzder, negativní barvení kongo červení a metylenovou modří, kultivace 5 dní, Ashbyho agar G-, pleomorfní, tyčky – kokotyčky, tvoří cysty, velikost 1,5-2 μm a více kvasinkab de Jelito2 Saccharomyces cerevisiae, negativní barvení nigrosinem, kultivace 2 dny, MEA G+, citronovitý tvar, velikost 3,7-9,7 x 2,6-6,4 μm sporosarcina Sporosarcina ureae CCM 860, negativní barvení nigrosinem, kultivace 1 den, MPAN G+, kulovitá nebo oválná, shluky po dvou a po čtyřech, tvoří kulaté spory, velikost 1,5-2 μm l-casei Lactobacillus casei subs. casei CCM 7088 T, neagtivní barvení nigrosinem, kultivace 2 dny, tekuté medium G+, nesporulující tyčinky se zaoblenými konci, výskyt jednotlivě a v řetízcích, velikost 2,0-4,0 x 0,7-1,1 μm bacilus subtilis Bacillus subtilis CCM 2216, negativní barvení nigrosinem, kultivace 2 dny, TSA G+, tyčky v řetízcích, endospory oválné nezduřující buňku, velikost 2-3 x 0,7-0,8 μm