Protokol č.3 – blok č.3
Farbenie bunkových inklúzií a fluorescenčné farbenie acidorezistených baktérií


Použité kmene
§Farbenie bunkových inklúzií
Ø Bacillus cereus CCM 2010
ØBacillus megaterium CCM 2007
ØSaccharomyces cerevisiae
§Fluorescenčné farbenie
Ø Mycobacterium phlei CCM 5639

Bacillus cereus CCM 2010
Farba : biela, krémová
Povrch : drsný
Okraje : vlnité

Bacillus megaterium CCM 2007
Farba : biela, nažltá
Povrch : drsný
Okraje : mierne zúbkaté

Saccharomyces cerevisiae
Farba : biela
Povrch : drsný
Okraje : zvlnené

Mycobacterium phlei CCM 5639
Farba : žltá
Povrch : drsný , miestami hrboľatý
Okraje : nerovnomerné

Farbenie bunkových inklúzií
Barvení volutinu
§Nátěr buněčné suspenze necháme zaschnout
§Převrstvíme na 1-3 minuty Löfflerovou methylenovou modří, vyzrálou alespoň 12 měsíců
§Opláchneme, osušíme a pozorujeme pod imerzním objektivem
Barvení tuku
§Buněčnou suspenzi rozmícháme s 0,1% roztokem Sudanu III v ethanolu a glycerolu, překryjeme krycím
sklíčkem a necháme působit 10-30 minut

Bacillus cereus CCM 2010
Tmavomodrá zrníčka volutinu ve světle  zbarvených buňkách
Červeně zbarvené kapénky tuku uvnitř buněk

Sacharomyces cerevisiae
Tmavomodrá zrníčka volutinu ve světle  zbarvených buňkách
Červeně zbarvené kapénky tuku uvnitř buněk

Bacillus megaterium CCM 2007
§Snímek nabarvených inkluzí volutinu byl bohužel pravděpodobně uložen do jiné složky, nebo omylem
smazán
§Inkluze tuku se v ani v jednom z preparátů nepodařilo nabarvit

Fluoresčenčné farbenie acidorezistentných baktérií
§Roztěr buněčné suspenze usušíme a nejméně 2 hodiny fixujeme v sušárně
§15 minut barvíme v roztoku auraminu-rhodaminu
§Opláchneme vodou a odbarvujeme 2-3 minuty 0,5% HCl v 70% ethanolu
§Promyjeme vodou a dobarvíme 0,5% manganistanem draselným po dobu 2-4 minut
§Usušíme a pozoruje pod fluorescenčním mikroskopem

 Mycobacterium phlei CCM 5639
Zeleně fluoreskující buňky mykobakterií na tmavém pozadí