Molekulární biotechnologie č.10 •Využití poznatků molekulární biotechnologie. Mikrobiální insekticidy. Mikrobiální insekticidy (přípravky k hubení hmyzu) •V budoucnu pravděpodobně nahradí chemické pesticidy (chemický prostředek sloužící v zemědělství k hubení nežádoucích rostlinných nebo živočišných organismů) •Jsou produkovány baktériemi druhu Bacillus thuringiensis Přeměna protoxinu na toxin •Baktérie druhu Bacillus thuringiensis •Produkují protoxin ve formě parasporálního krystalu •V zažívacím traktu housenek dochází k přeměně protoxinu na toxin – díky alkalickému prostředí a přítomnosti specifických proteáz a střevní mikroflory Parasporální krystal (Glick a spol.2003) Mechanismus účinku aktivního toxinu Bacillus thuringiensis •Toxin se váže na střevní epitelové buňky housenek •V epitelu vznikají membránové kanálky, kterými uniká ATP. •To vede k hladovění, snížení buněčného metabolismu, dehydrataci a smrti hmyzu • • Membránové kanálky (Glick a spol. 2003) Toxiny různých kmenů Bacillus thuringiensis •Jsou vysoce specifické pro určitý druh hmyzu (hmyzích škůdců) •Jsou biodegradabilní a proto jejich používání nevede ke vzniku resistence Byly charakterizovány a klónovány geny •Různých kmenů B.thuringiensis kódující různé toxiny •Geny bývají lokalizovány na plasmidech Izolace různě velkých plasmidů, z nichž některý nese protoxinový gen Vyhledání plasmidu s protoxinovým genem •Lze provést pomocí DNA/DNA hybridizace •DNA sonda se připraví ze známého protoxinového genu Genetické inženýrství kmenů Bacillus thuringiensis •S cílem rozšířit specificitu účinku toxinu na další druhy škodlivého hmyzu a •Zkonstruovat bakteriální kmeny nesoucí více genů toxicity •Příp. docílit konstitutivní exprese • • Rozšíření toxicity kmenů B.thuringiensis (Glick a spol.2003) Specifické geny kódující mikrobiální protoxiny •Byly klonovány do sinic (slouží jako zdroj potravy komárům) a to umožnilo ničit komáry •Byly klonovány do půdní baktérie Pseudomonas fluorescens a to vedlo ke zlepšení růstu hospodářských plodin – byl eliminován nežádoucí účinek hmyzích škůdců Genově modifikovaná Pseudomonas fluorescens Subklonování protoxinového genu •FCh 25.10.2010