2.Technologie rekombinantní DNA
Směs technik


Techniky
•Některé nové
•Některé z jiných oborů
•

Nejdůležitější mezníky při vývoji technik rekombinantní DNA
•Tab.
•1869 po prvé izolována DNA (Miescher)
•1944 DNA je nositelkou genetické informace (Avery)
•1953 DNA je dvoušroubovice (Watson a Crick)
•1957 objevena DNA polymerasa – používaná pro přípravu DNA sond (Kornberg)
•1961 objevena DNA renaturace (Marmur a Doty)
•1962 popsány a izolovány restrikční endonukleázy (Arber, Nathan, Smith)
•1966 rozluštěn genetický kód (Nierenberg, Ochoa, Khorana)
•1967 objevena DNA ligáza (Gellert)
•1972-1973 vyvinuty techniky DNA klonování (Boyer, Cohen, Berg)
•1975 vyvinul metodu hybridizace po přenosu DNA na membránu (Southern)
•1975-1977 vyvinuta metoda DNA sekvencování (Sanger a Barrell, Maxam a Gilbert)
•1981-1982 transgenní rostliny, transgenní živočichové
•1985 objevena PCR (Mullis)
•

1. Štěpení DNA restrikčními nukleázami
•Izolace a manipulace s jednotlivými geny


2.Sekvencování
•Stanovení pořadí nukleotidů v purifikovaném fragmentu DNA
•Určení počátku a konce genu
•Určení aminokyselinových sekvencí, které kóduje

3. Hybridizace nukleových kyselin
•Velmi přesná a citlivá detekce specifických sekvencí DNA nebo RNA
•S využitím komplementárního párování bazí

4. Klonování DNA
•Příprava velkého množství  identických molekul (kopií) DNA


5. DNA inženýrství
•Příprava modifikovaných verzí genů
•Jejich včlenění zpět do buněk
•A využití
•Příp. navýšení genetické informace buněk
•Konstrukce GMO