Úloha č. 2
DETEKCE I/D POLYMORFIZMU GENU PRO ACE


ANGIOTENSINKONVERTASA (ACE)
•aktivace vazokonstrikce aktivace vazodilatace
•
•angiotensinogen kininogen
• renin kalikrein
•angiotensin I bradykinin         vazodilatace
• ACE
•angiotensin II
•
•aldosteron           vazokonstrikce inaktivní produkt
•
•
•

RENIN-ANGIOTENSINOVÝ SYSTÉM (RAS)
•úloha: udržování homeostázy
•
• regulace krevního tlaku
• řízení vylučování vody a iontů
•
•    behaviorální efekty v mozku (stimulace žízně a chuti na slané, ovlivňování paměti a učení,
atd.)
•
•byla zjištěna interakce mezi mozkovým RAS a klasickými neurotransmiterovými systémy (systém
cholinergní, noradrenergní, dopaminový, GABAergní a opioidní)

POLYMORFIZMUS I/D GENU PRO ACE
•přítomnost (I) nebo absence (D) úseku DNA  v intronu 16 o délce 287 bp
»
» I/I – běžná varianta = wild type
•VÝSLEDNÝ GENOTYP I/D – heterozygot
– D/D – rizikový homozygot
•
•ovlivňuje plazmatickou hladinu ACE
• hladina se snižuje od genotypu DD po genotyp II
•
•rizikový faktor
• aterosklerózy, hypertenze a jejích komplikací, neurodegenerativních, afektivních či kognitivních
poruch a chorob (Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba)
•
•

STUDIE I/D ACE
- vztah k funkcím mozku
•Arinami et al. (1996): polymorfizmus I/D ACE je jedním z genetických faktorů ovlivňujících hladinu
substance P (vnímání bolesti, neurotransmiter v mozku) a může mít vztah k dispozicím k afektivním
poruchám.
•
•Amouyel et al. (1996): sledoval vliv polymorfizmu I/D ACE na kognitivní funkce (čtení, schopnost
soustředění) a zjistil, že frekvence alely D (genotyp DD) byla vyšší u skupiny osob s kognitivní
poruchou.
•
•Richard et al (2000): potvrdil homozygotní kombinaci alel DD jako rizikový faktor kognitivních
poruch.
•

POSTUP (I)
–PCR - amplifikace vybraných úseků
•
• 94°C 2,5 min
•
• 94°C 30 sek (denaturace)
•         30x 59°C 30 sek (annealing)
• 72°C 30 sek (extenze)
•
• 72°C 5 min (extenze)
• 10°C hold
C:\Documents and Settings\HP\Dokumenty\Downloads\techne progene.JPG

POSTUP (II)
• agarózová elektroforéza
1.příprava:
• agaróza + TBE + ethidium bromid → GEL
•
C:\Users\Lukáš\Desktop\gel_structure_of_agarose.bmp C:\Users\Lukáš\Desktop\Agarosa (1).jpg

POSTUP (II)
•
2.elektroforéza:
•
•
C:\Documents and Settings\HP\Dokumenty\Downloads\Elfo vana schema.jpg

VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ
•Výsledný gel
•
• alela I cca 490 bp
• alela D cca 190 bp
•
•
C:\Documents and Settings\HP\Plocha\Cvika 2011\I_D gel.jpg