Úloha č. 3
DETEKCE POLYMORFIZMU TaqIA GENU PRO DOPAMINOVÝ RECEPTOR D2


DOPAMIN
•Neurotransmiter, neurohormon (inhibice prolaktinu)
•
•Dopaminergní neurony – hypotalamus, substantia nigra, ventrální tegmentum – bohatá komunikace s
ostatními částmi mozku (prefrontální kortex).
•
•Funkce:
–Kontrola motoriky
–Spánek, nálada, pozornost, odměňovací systém, modulace chování
–Učení, paměť, kognitivní funkce
–

DOPAMIN
•Receptory – D1, D2, D3, D4, D5 …
–spřažené s G proteiny (inhibiční i excitační účinky)
–D2 – inhibice adenylyl cyklázy
–
–
F1.large.jpg

TaqIA POLYMORFIZMUS
•SNP polymorfizmus v genu pro DRD2 na chromozomu 11
•lokalizovaný v 3‘ UTR oblasti mRNA
•
•
•
•
•
•tvoří 2 alely: A1 a A2
• Homozygoti pro alelu A1 mají o 30 – 40 % nížší denzitu D2 receptoru v mozku.
•
•
800px-MRNA_structure.svg.png

ADHD
attention deficit hyperactivity disorder – hyperaktivita s poruchou pozornosti
•multifaktoriální onemocnění podmíněné různými kandidátními geny
•
•výskyt: u 6 –10 % dětské populace v poměru chlapci:dívky 3:1 až 10:1 (dle diagnostických kritérií)
•
•symptomy: nadměrná aktivita, nepozornost a impulzivita
•
•souvislost mezi TaqIA polymorfizmem (riziková alela A1) a ADHD, kdy homozygoti pro tuto alelu
vykazují výrazně vyšší frekvenci onemocnění

KANDIDÁTNÍ GENY
•geny kódující jednotlivé proteinové složky dopaminergního systému
• dopaminové receptory (DRD2, DRD3, DRD4 a DRD5),
• dopaminový transportér (DAT1),
• dopamin-b-hydroxylázu (DBH),
• serotoninový transportér (5-HTT).
•
•sleduje se přítomnost rizikových alel, hodnotí se jejich vliv a kombinace vlivů interagujících
genů na vývoj a závažnost onemocnění
•

POSTUP
•PCR
•
•restrikční analýza
•
•agarózová elektroforéza

RESTRIKČNÍ ANALÝZA
•restrikční endonukleáza štěpí dsDNA ve specifické sekvenci (restrikční místo). •cílová sekvence
enzymu obsahuje 4 – 8 bazí a většinou je palindromatická
•
•     TaqI 5'...T    C G A...3'
 restriktáza 3'...A G C    T...5'
•
•      možnost detekce SNP, je-li v                místě restrikce
•

VÝSLEDKY
•TaqI A1 jeden neštěpený fragment o délce 310 bp
•TaqI A2 dva štěpené fragmenty o délce 180 a 130 bp
C:\Users\Lukáš\Desktop\Obrázek1.jpg