Úloha č. 7
SEKVENACE ČÁSTI GENU PRO LAKTÁZU: URČENÍ LAKTÓZOVÉ INTOLERANCE


LAKTÁZA
•enzym z rodiny ß-galaktosidáz
•
•tvořena v enterocytech tenkého střeva
•
•klíčový enzym při trávení mléka
• hydrolyzuje disacharid laktózu na jednoduché stravitelné cukry
•
•
•
•
C:\Documents and Settings\HP\Plocha\Cvika 2011\laktaza.jpg

LAKTÓZA
•laktóza (mléčný cukr):
• ß-D-galaktóza a ß-D-glukóza spojené glykosidickou vazbou
•
•
•
•
•
•
•v mateřském mléce savců, kde představuje 2-8 % rozpuštěných látek
•
•
C:\Documents and Settings\HP\Plocha\Cvika 2011\laktosa.gif

AKTIVITA LAKTÁZY
•objevuje se od 8. týdne intrauterinního života u vyvíjejícího se plodu a postupně narůstá až do
období porodu
•
•nejvyšší aktivity dosahuje po narození
•
•s věkem se aktivita postupně snižuje

LAKTÓZOVÁ INTOLERANCE
•onemocnění spojené s nedostatečnou produkcí laktázy
•
•příčiny:
• genetické vlohy
• sekundární příčiny
•
•zdravotní obtíže:
• průjem, křeče a bolesti břicha
•

TESTY
•vodíkový dechový test
•
•určení pH stolice
•
•měření glykémie
•
•endoskopické vyšetření

DOMÁCÍ TEST
• „Vypijte dvě dvoudecilitrové sklenice mléka na lačný žaludek a pozorujte symptomy v zažívacím
traktu, které se objeví v následujících 4 hodinách. Zopakujte test druhý den s několika gramy sýra
(který neobsahuje mnoho laktózy). Jestliže se nepříjemné trávicí symptomy vyskytnou po mléce a
nikoliv po sýru, trpíte pravděpodobně intolerancí laktózy. Jestliže se symptomy objeví jak po
mléce, tak po sýru, můžete být alergičtí na mléčné výrobky.“

LÉČBA
•vyloučení (případně omezení) mléčných výrobků z jídelníčku
•
•přijímání laktázy ve formě léků

CÍL TOHOTO CVIČENÍ
•sekvenace DNA a stanovení přítomnosti jednobodového polymorfismu C13910T nacházejícím se v
regulační oblasti genu pro laktázu,            u kterého byla nalezena asociace s geneticky
podmíněnou formou laktózové intolerance
•
•genotypizace tohoto polymorfismu umožňuje odlišit diagnózu laktózové intolerance způsobenou v
důsledku genetických předpokladů od případů vyvolaných sekundárními vlivy

POSTUP
•amplifikace cílových úseků pomocí PCR
•
•agarózová elektroforéza (1 proužek cca 120 bp)
•
•přečištění pomocí ExoSAP
•
•sekvenační reakce
•
•přečištění po sekvenační reakci
•
•sekvenace a vyhodnocení sekvencí