Úloha č. 6
Detekce trombofilních faktorů pomocí fragmentační analýzy


Srážlivost krve
•Důležitý homeostatický proces
•
•Složky koagulační (srážecí) kaskády:
–Koagulační faktory – proenzymy přítomné v krvi (I – XII).
–Fosfolipidy v membránách trombocytů.
–Ionty Ca2+ (faktor IV).
–Antikoagulační faktory (antitrombin, protein C, trombomodulin).

File:Coagulation full.svg
Srážecí kaskáda
MTHFR

Polymorfizmy
•
•Polymorfizmus 20210 G/A genu pro faktor II
•
•Polymorfizmus 1691 G/A genu pro faktor V
•
•Polymorfizmus 677 C/T genu pro MTHFR
•

Postup
•PCR
•
•Restrikční analýza
•
•Fragmentační analýza

PCR + restrikční analýza
•multiplexová PCR – v reakční směsi použity primery všech             analyzovaných genů.
•
•primery – a) jeden z páru obsahuje mismatch = vytváří restrikční              místo.
•          b) druhý z páru nese na 5´ konci fluorofor (TAMRA / FAM).
•
•
•
•restrikce – detekce SNP polymorfizmu
•všechny polymorfizmy mají TaqI restrikční místo

Fragmentační analýza
•detekce fragmentů po restrikční analýze při kapilární elektroforéze.
•
ABI%203130xl.jpg

Vyhodnocení
•