Přečištění DNA pomocí EDTA (ethylendiamintetraoctová kyselina) a ethanolu


Do destičky napipetujte 2,5 µl 125 mM EDTA,  10,0 µl vzorku po PCR a 25,0 µl 100% ethanolu.
Destičku přelepte fólií a několikrát otočte, aby se směs promíchala. Následuje inkubace ve tmě po
dobu 15 min při pokojové teplotě. Poté destičku centrifugujte po dobu 30 min při 3000 x g při 4 °C.
Z destičky odlepte fólii a nechte ji centrifugovat dnem vzhůru na papírové utěrce po dobu 1 min 8 x
g při 4 °C. Do destičky napipetujte 30 µl 70% ethanolu, přelepte fólií a centrifugujte 15 minut při
3000 x g 4 °C. Z destičky poté odlepte fólii a nechte ji centrifugovat dnem vzhůru na papírové
utěrce po dobu 1 min 8 x g při 4 °C. Vložte destičku do termostatu a nechte odpařit ethanol při 95
°C cca 1 min. Přidejte 10,0 µl formamidu, destičku promíchejte na vortexu a krátce zcentrifugujte.
Vzorky přeneste do nové destičky a nechte DNA zdenaturovat v termostatu cca 2 min. Díky tomu dojde
k oddělení vláken od sebe a vzniku ssDNA. Aby zůstala DNA v jednořetězcové formě, zchlaďte destičku
v mrazáku a krátce zcentrifugujte.