Rychlá cytologická metoda
Roztlakové preparáty
Materiál: kořenové špičky rostlin
Definice meristému
• v raném vývoji embrya se dělí všechny buňky
• později je dělení buněk omezeno pouze na malé
oblasti, ve kterých si buňky zachovávají
embryogenní charakter a schopnost dělení (apikální
meristémy = primární meristémy - stonkový,
kořenový) - jejich činností vznikají nové buňky,
které po diferenciaci vytvářejí rostlinné tělo
• sekundární meristémy
– kambium a felogén
– axilární meristémy
Charakteristika meristematických
buněk
• malé, izodiametrální buňky
• tenká buněčná stěna
• velké jádro (jádro-plasmový poměr)
• velká hustota protoplastu – malé vakuoly
Buněčný cyklus
G0
fáze: buňka se nedělí,
je součástí pletiva
G1 fáze (z ang. gap = mezera): na buňce není pozorovatelné co se v ní děje,
probíhá syntéza RNA a bílkovin
S (syntetická) fáze: syntéza DNA
G2 fáze: syntéza bílkovin pro vznik a dělení jádra (histony a mikrotubuly)
M fáze (mitóza): nepřímé dělení jádra
C fáze (cytokineze): dělení celé buňky
I (interfáze): doba,
kdy se buňka
připravuje na dělení,
tj. G1, S a G2 fáze
mujweb.cz/Veda/biologie/b.%20cyklus.htm.
Podélný řez apexem stonku Coleus
příklad stavby a
lokalizace stonkového
apikálního a
axilárního meristému
pro pozorování
jaderného dělení
lze použít i listová
primordia
Kořenový apikální meristém Linum
vlastní meristém
klidové centrum
kořenová čepička
kolumela = střední
sloupek kořenové
čepičky
• přírodní
karmín - červec nopálový
orcein -lišejníky (Lecanora, Roccella)
hematoxylin - dřevo kampešky (Haematoxylon
campechianum)
brasilin - dřevo druhů rodu Caesalpinia
(Caesalpinia sappan, C. brasiliensis)
• syntetická
Dělení barviv podle původu
Karmín
kyselina karmínová Dactylopius coccus
Cochineal, Natural Red 4, C.I. 75470
Orcein
archil, orchil, lacmus, litmus a C.I. Natural Red 28, (E121)
červené v kyselém pH, modré v alkalickém pH
Mitotické jedy
• halogenové deriváty aromatických uhlovodíků (pdichlór
benzén, α-bróm naftalén, 8-hydroxychinolin)
• alkaloidy (kolchicin, vincristin)
• herbicidy (oryzalin)
Obecný postup
• fixace Carnoy, Farmer
• macerace HCl
• roztlačení
• barvení acetokarmín, laktopropionový orcein
• projasnění levulózový sirup, glycerol
fixačně-macerační směs
předpůsobení
Fixačně-macerační směs
Dostál J. (VÚOK Průhonice)
• 1 díl 96% etanolu
• 1 díl normálního butanolu
• 1 díl ledové kyseliny octové
• 1 díl konc. HCl (35 – 36%)
• 4 díly destilované vody
Pracovní postup
Materiál: kořeny Allium cepa L.
bez předpůsobení – fáze buněčného cyklu
●
odběr naklíčených kořenů
●
fixace a macerace v činidle
●
izolace kořenové špičky
●
barvení laktopropionovým orceinem
●
rámování lakem na nehty
předpůsobení v hydroxychinolinu – narušení cytoskeletu
●
inkubace kořenů v v 0,02 M roztoku hydroxychinolinu
●
odběr naklíčených kořenů
●
fixace a macerace v činidle
●
izolace kořenové špičky
●
barvení laktopropionovým orceinem
●
rámování lakem na nehty
Laktopropionový orcein
roztlakový preparát Allium cepa
Olympus BX-51
procházející světlo
Olympus BX-51
DIC
bez předpůsobení