ØParazité jsou klinicky významní živočiši, ne vždy mikroskopičtí ØLze je členit dle umístění v organismu, zoologických kritérií a dalších vlastností ØMezi endoparazity (vnitřní parazity) patří: •Prvoci- Protozoa •Hlístice- Nematoda •Motolice- Trematoda •Tasemnice- Cestoda Ø ØMezi ektoparazity patří různí členovci (vši, zákožka svrabová,…) ◦ ØTaké bývá zvykem členit parazity podle orgánových soustav: •střevní (od lamblií po tasemnice) •krevní (intra- a extraerytrocytární) •urogenitální (například bičenky) •tkáňoví (například toxoplasma) ØToto členění má význam i pro diagnostiku ØU tkáňových parazitů má například logicky mnohem větší význam nepřímý průkaz – pro přímý průkaz nelze nalézt vhodný vzorek, který by měl být odebrán ØStřevní parazité jsou nejběžnější ØNěkteří způsobují průjmová onemocnění, jiní spíše nespecifické problémy (dyspepsie, svědění, únavu…) ØMohou náležet do kterékoli ze skupin endoparazitů ØNejběžnější: •Prvoci: améby (Entamoeba histolytica), bičíkovci (Giardia intestinalis = Lamblia) •Hlístice: Roup, škrkavka a další •Motolice: např. Fasciolopsis buski •Tasemnice: hovězí a vepřová tasemnice a spousta jiných tasemnic ØPůvodci alimentárních průjmových nákaz- člověk se nakazí pozřením cyst s vodou nebo potravinami ØRozšířeny po celém světě, nejvíce v teplém podnebném pásmu http://www.wormsandgermsblog.com/uploads/image/Giardia_lamblia.png trofozoit cysta C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\56 GiardiaTrofozAM.jpg ØEntamoeba histolytica (měňavka úplavičná) se vyskytuje ve dvou formách: •Forma minuta - menší, neinvazivní tvořící cysty •Forma magna – větší, invazivní ØPůvodce střevních i mimostřevních infekcí v tropech či subtropech ØTzv. cestovatelské průjmy, i mimostřevní infekce (jaterní amébový absces) }Běžně se vyskytuje volně ve vodě a půdě }Původce amébové encefalitidy a keratitidy (u nositelů kontaktních čoček) acanth_ring_late_Fig_2_31 }Nečlánkované, protáhlé tělo }Gonochoristé }Původci střevních nematodóz: } Enterobius vermicularis } Ascaris lumbricoides 14936 ØDrobná hlístice ØZdržuje se ve střevě, člověk se nakazí spolknutím infekčních vajíček ØSameček je o něco menší než samička ØVajíčka klade v perianálních řasách ØVyskytuje se zejména v dětských kolektivech ØU malých dětí často dochází k autoinfekci ØPříznaky: zažívací potíže, bolesti v břiše,svědění v oblasti análního otvoru, neklid Ø http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2004/Enterobius/Enterobius_LifeCycle.gif accroup superroup }Hlístice, dospělci žijí v tenkém střevě člověka } Ascariasis_LifeCycle ascaris2 Škrkavka Obrázky převzaty z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA (vlevo) a www.medmicro.info (vpravo) }Mohou žít v plicích, ledvinách, játrech, v močových cestách }Dorzoventrálně zploštělé tělo, oválné, listovité či kopinaté }Prochází několika larválními stádií, složitý ŽC Trem054p image033 Fasciolopsis buski (motolice střevní) } } }Zploštělé tělo s hlavičkou (scolex) }a s články (proglotidy), které se }směrem dozadu prodlužují }a rozšiřují }Proglotidy se zralými vajíčky }se oddělují a odcházejí ven z těla hostitele }ŽC přes 1-2 mezihostitele a definitivního hostitele 18753cestoda ØTaenia saginata (tasemnice bezbranná) ØTaenia solium (tasemnice dlouhočlenná) Ø ØMezihostitelé: hovězí dobytek a vepři ØDefinitivním hostitelem je člověk (nakazí se syrovým infikovaným masem) ØBolesti břicha, průjmy nebo zácpa, nechutenství, hubnutí, alergická reakce http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2004/Taeniasis/Taenia_LifeCycle.gif Tasemnice saginata Obrázky převzaty z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA ØNěkteří parazité mohou žít přímo uvnitř těla •Někteří prvoci, jako toxoplasma, tvoří parazitární cysty •Některé hlístice mohou být přítomny ve tkáních, např. Toxocara canis či T. cati •Některé tasemnice (např. tasemnice dlouhočlenná) mohou ve tkáni tvořit boubele ØSymptomatologie je různorodá ØU toxoplasmózy cysty jsou klinicky téměř němé. Cysticerky tasemnic mohou být nebezpečné např. tlakem na důležité orgány. ØDiagnostika je obtížná, není co odebrat na přímý průkaz ØPůvodce toxoplazmózy ØPrvok, který je přenášen kočkami, i když se tvrdí, že chovatelé psů jsou ve větším riziku (protože na srsti donesou domů částečky kočičího trusu) ØVětšina infekcí u imunokompetentních osob je bez příznaků ØNebezpečí pro } těhotné ženy 10 Toxo_ultrastructure 14 toxoplasma_lifecycle Životní cyklus toxoplasem webdb.dmsc.moph.go.th ØPřenos na člověka: •Expozice oocystám •Transplacentárně •Požitím syrového či nedostatečně tepelně upraveného masa •Laboratorní ínfekce • Ø90 % asymptomatický průběh, 10% krční či šíjová lymfadenopatie, někdy celkové příznaky ØOční forma či další orgánové postižení (polyomyelitida, myokarditida, meningitida, hepatitida) ØKongenitální infekce- potrat či těžké vývojové vady C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\125 wurmprophylaxe_toxocara cati.jpg }Střevní parazité psů a koček }Člověk se nakazí příležitostně }(kontaminovanou potravou, vodou) }Dostávají se do nejrůznějších orgánů } (jater, srdce, plic, mozku, svalů, oka..) Toxocara_LifeCycle C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\129 Trichinella%20cyst.jpg }Drobné hlístice, dospělci cizopasí v tenkém střevě obratlovců i člověka }Hlavními hostiteli jsou šelmy, domácí a divoká prasata }Samičky ve střevě rodí živé larvy, které putují do kosterního svalstva a vytváří zde cysty }Další hostitel se nakazí pozřením masa }s encystovanými larvami http://publichealth.lacounty.gov/acd/images/Trich_LifeCycle.gif ØMezi další významné parazitózy patří leishmaniózy způsobené bičíkovci rodu Leishmania Ø Vyskytují se v celém tropickém a subtropickém pásmu ØPřenašečem je drobný dvoukřídlý krev sající hmyz (koutule, flebotom) rodu Phlebotomus ØExistuje jich asi dvacet významných druhů, které se dělí jednak na leishmanie „Starého“ a „Nového“ světa, jednak na kožní, kožně-slizniční a viscerální ØMohou způsobovat od znetvoření kůže až po postižení jater a sleziny, často smrtelné 21 leis14 22 cutaneous 23 muco2 http://web.indstate.edu/thcme/micro/parasitology ØMezi sexuálně přenosnými parazitárními onemocněními je jediná opravdu významná trichomonóza •Diagnostika je zpravidla provedena zároveň s bakteriologickou, protože ze začátku nemusí být původ jasný ØV močových cestách jsou nejdůležitějšími parazity některé motolice (schistosomy), tedy Trematoda •Diagnostika je částečně mikrobiologická, částečně histologická ØBičíkovec, který se přenáší téměř } výhradně sexuálně, i když } výjimečně je možný i jiný způsob } přenosu ØMůže dojít k poškození děložního čípku či sterilitě ØU muže je onemocnění zpravidla bezpříznakové ØVzhledem k tomu, že lék volby u anaerobních infekcí (metronidazol) zabírá i na trichomonády, počet trichomonóz v poslední době klesá STDTrichomonas }Schistosoma haematobium (krevnička močová) }Kromě toho ještě krevnička střevní a krevnička jaterní způsobující krvavé průjmy a jaterní schistosomózy bulinus-truncatus-schistosome_72945_1 ØMezi krevními parazity jsou samozřejmě nejdůležitější malarická plasmodia ØBičíkovec Trypanosoma brucei žije v krevním řečišti a způsobuje spavou nemoc. Tamtéž přebývá i Trypanosoma cruzi, způsobující Chagasovu nemoc ØSymptomatologie: u všech se objevuje horečka, ostatní příznaky záleží na původci }Trypanosoma brucei – spavá nemoc, přenašečem moucha tse-tse }Trypanosoma cruzi- Chagasova nemoc, přenašeči ploštěnci Trypanosoma cruzi Trypanosoma brucei ØJe jeden ze čtyř druhů malarických plasmodií ØMalárie je celosvětově jednou z těch úplně nejzávažnějších chorob ØPřenašečem je komár rodu Anopheles ØNejhorší průběh má „tropika“ neboli „maligní terciána“, působená P. falciparum Ø Mírnější jsou obě „benigní terciány“, působené P. vivax a P. ovale ØKvartána, působená P. malariae, je vzácná 16 malaria web.indstate.edu Pozdní trofozoit Častný trofozoit Schizont Merozoiti Trofozoit a gametocyt Plasmodium erytrocyt trofozoiti Anopheles Obrázek převzat z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA Mikrofilárie A – Wuchereria bancrofti B – Brugia malayi C – Loa loa D – Mansonella perstans E – Mansonella ozardi Obrázky převzaty z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA tumblr_mdathhjwQb1r8vrhxo1_500 Elephantiasis Loa loa Wuchereria bancrofti C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\138 Sarcoptes2a.gif C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\07 Pediculus capitis a hnida.jpg C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\03 hnida.jpg C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Labouši\T23 paraziti\08 34663240.Pediculuscapitis.jpg ØNa střevní parazitózy se posílá kusová stolice (viz dále) ØNa trichomonózu se posílá buďto sklíčko na barvení Giemsou (samotné nebo společně se sklíčkem na barvení Gramem), nebo výtěr v soupravě C. A. T. swab ØNa průkaz akantaméb se zasílají použité kontaktní čočky ve své tekutině, případně lze provést seškrab rohovky ØU tkáňových parazitóz se posílá sérum ØU ostatních podle situace (moč, obsah cysty…) ØPosílá-li se stolice na parazitologické vyšetření (obvykle kombinace metod Kato a Faust), je nutno – na rozdíl od bakteriologie – zaslat vzorek stolice velikosti lískového ořechu ØNádobka, ve které je zasílán, nemusí být výjimečně sterilní ØDůležitá je mikroskopie, buď nativní preparát nebo barvení (Giemsovo barvení) ØKultivace se používá zřídka, prakticky jen u trichomonád a akantaméb ØZ jiných metod přímého průkazu se prosazuje v.poslední době PCR Ø ØNepřímý průkaz se používá u tkáňových parazitóz, zejména toxoplasmózy, larvální toxokarózy a dalších ØJako základ se používají metody, které představují v podstatě nativní preparát v různých modifikacích ◦U metody dle Kato se používá dobarvení pozadí malachitovou zelení, aby se paraziti zvýraznili ◦Faustova metoda je koncentrační (viz dále) ØGrahamova metoda se používá jen u roupů (viz dále) ØPrincip: Stolice se opakovaně smíchá s roztokem síranu zinečnatého, centrifuguje a supernatant použije do dalšího kroku. Nakonec se roztok doplní až po vršek zkumavky a překryje krycím sklíčkem. Paraziti ulpívají na krycím sklíčku zespodu (viz obrázek). Sklíčko se přenese na podložní sklo, kde je již Kato. Faust Na druhé polovině sklíčka je již mezitím připravena metoda dle Kato ØNa anální otvor (a hlavně perianální řasy) nalepena speciální průhledná lepicí páska. Ta je pak odlepena a nalepena na podložní sklíčko ØPrůhlednost pásky je zásadní, jinak dost dobře nelze mikroskopovat ØJe jednodušší než vyšetření stolice. Používá se však častěji u dětí ØV diagnostice krevních parazitů je důležité provedení nátěru metodami tzv. tenkého nátěru a tlusté kapky ØPro obě metody se používá čerstvá, nesrážlivá krev. Tenký roztěr se fixuje, tlustá kapka ne. Oboje se pak barví Giemsovým barvením sklimal Tlustá kapka Tenká kapka ØTrichomonády se v poslední době diagnostikují zejména kultivačně-mikroskopickým vyšetřením: ◦odebere se výtěr na tamponu zanořeném do média C. A. T. ◦médium se nechá kultivovat do druhého dne ◦kapka média se mikroskopuje jako nativní preparát ØTyto preparáty však nelze uchovat ØProto v praktiku máme druhý možný způsob – nátěr na sklíčku barvený dle Giemsy s_1168673735 C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z internetu\Medici\Paraziti\07 slide7-vwp_g420.jpg http://www.bu.edu/cme/std/images/slide7-vwp_g420.jpg 08 TRVA before_cytokinesis ØÚkol 2a, b, c (Faust, Kato, Graham): bez imerze, objektivy 4×, 10×, 40× ØÚkol 4 (Trichomonas vaginalis, Giemsovo barvení): imerzní olej, imerzní objektiv 100× ØÚkol 5 (Plasmodium, tenký roztěr, Giemsa): imerzní olej, imerzní objektiv 100× ØNa střevní parazity používáme zpravidla nádobku, která nemusí být sterilní, protože bakteriální kontaminace výsledek neovlivní ØNa roupy existuje jiná metoda: Grahamova metoda, kde se nalepí páska na perianální řasy a poté na sklíčko }Na krevní parazity se doporučuje zasílat tenký roztěr a tlustá kapka }Prohlédněte si videoklip a pokuste se popsat přípravu tlusté a tenké kapky. C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z Parasite tutoru\Tlustá kapka.PCT C:\Uživatel\Ondra\Obrázky a fotky\Odborné\Z Parasite tutoru\Tenká kapka.PCT Obrzky převzaty z CD-ROM „Parasite-Tutor“ – Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seatle, WA Po čem pátráme Použitý způsob odběru toxoplasmóza sérum (na protilátky) trichomonóza C. A. T., nebo nátěr-sklo močová schistosomóza histologické vyšetření giardiáza 12níková šťáva (stolice) akantamébiáza použité kontaktní čočky Úkol 2 - Mikroskopie střevních parazitů ØNa bočním stole máte sklíčka, která obsahují Faustovu metodu a metodu dle Kato. ØSklíčko k Faustově koncentrační metodě bylo přemístěno pinzetou na jednu polovinu podložního sklíčka (pokud nebylo, opatrně ho tam přemístěte z horní plochy zkumavky) Ø(Na bočním stole máte v každém případě na ukázku i původní zkumavky s dalšími sklíčky) ØNa druhé polovině sklíčka je již nachystán preparát dle Kato (to je ten zelený) ØObě mikroskopujte společně, bez imerze, objektivy 10×, 20×, 40×. To, co uvidíte, je obraz normální stolice – sklíčka jsou negativní Ø ØProhlédněte si také sklíčko s lepicí páskou – vyšetření roupů Grahamovou metodou ØTato sklíčka jsou pozitivní, obsahují vajíčka roupů ØProhlédněte si na bočním stole naše tasemnice, škrkavky a roupy, naložené v lihu Ø Nakreslete dva z nich do protokolu Úkol 3b – demonstrace některých parazitů a jejich životních cyklů ØProhlédněte si obrázky životních cyklů parazitů na pracovních stolech a doplňte popisky }Alespoň tyto tvary byste měli znát ke zkoušce eggs Škrkavka Tenkohlavec bičíkový taenia1 Roup Enterobius Škrkavka Ascaris Tenkohlavec Trichuris Tasemnice Taenia ØMikroskopujte s imerzí (objektiv 100×, imerzní olej) ØV některých preparátech mohou být kromě trichomonád i kvasinky ØPravděpodobně uvidíte leukocyty a trichomonády, případně také bakterie, epitelie atd. 04 Trichomonas%20vaginalis1 Trichomonas Leucocyty 04 Trichomonas%20vaginalis1 17379 ØPreparáty malárie jsou velmi vzácné. Prosíme, vůbec se nedotýkejte mikroskopu, kromě jemného doladění mikrošroubu na své oči. Uvidíte erytrocyty a mladé trofozoity Plasmodium falciparum 16 malaria (Zúženo na lidská krevní stádia, tj. ne jaterní a ne stádia v komárovi) Merozoites ØJak již bylo řečeno, u tkáňových parazitů se často používá nepřímý průkaz ØČást 6a) je KFR – boční stůl. První důlek je test antikomplementarity séra, ve druhém ředění 1 : 5, dále geometrickou řadou (1 : 10, 1 : 20, 1 : 40, 1 : 80 atd.) ØPozitivní je nepřítomnost hemolýzy, negativní je hemolýza ØČást 6b) je ELISA – způsob výpočtu: co je vyšší než (C1+ D1) : 2, je pozitivní. A1 je blank, B1 negativní, E1 pozitivní kontrola ØP: zdravá těhotná žena, doma kočky ØQ: jiná těhotná žena, bez koček ØR: mladá dáma toulající se v lesích; bez koček, zato však v kontaktu s prostředím kontaminovaným trusem divokých zvířat ØS: senior, pracující v zahradě, po které se procházejí kočky Pacient KFR ELISA IgA ELISA IgG P 1:10 – + Q 0 – – R 1:160 + + S 0 – – }Bed bug Louse Itch mite Flea Crab louse Tick }Cimex Pediculus Sarcoptes Pulex Phthirus Ixodes }Štěnice Veš hlav. Zákožka Blecha Veš muňka Klíště všichni členovci ØJde o preparát ze stolice mladého muže s dobrodružnými sklony, který cestoval po Indii a pil vodu z Gangy. Pomocí metod Faust a Kato byly nalezeny podezřelé útvary, po barvení Gomoriho trichromem určené jako Entamoeba histolytica/dispar (mikroskopicky nelze rozlišit). U tohoto pacienta byla diagnostika prováděna i v NRL pro střevní parazity v Praze a pomocí PCR určeno, že jde o E. histolytica ØNa rozdíl od Entamoeba coli má E. histolytica maximálně čtyři jádra. Většinou se ale objevují a mizí při proostřování, tj. nejsou viditelná najednou. }Prvoci – Protozoa •Bičíkovci - Trypanosomy (T. brucei, T. cruzi) ◦ - Leishmanie (L. major, L. braziliensis, ◦ L. chagasi,…) ◦ - Giardia intestinalis ◦ - Trichomonas vaginalis •Améboidní prvoci - Entamoeba histolytica ◦ - Acanthamoeba spp. •Sporozoa - Toxoplasma gondii ◦ - Plasmodia }Motolice- Trematoda •Schistosomy- krevničky •Motolice plicní a jaterní (Fasciola hepatica) •Motolice střevní (Fasciolopsis buski) • }Tasemnice- Cestoda •Původci střevních cestodóz - Taenia saginata – - Taenia solium •Původci tkáňových cestodóz -Taenia solium – - Echinococcus granulosus – (měchožil zhoubný) } }Hlístice- Nematoda •Původci střevních nematodóz – - Enterobius vermicularis (roup dětský) – - Ascaris lumbricoides (škrkavka dětská) – - Trichuris trichiura (tenkohlavec lidský) •Původci tkáňových nematodóz – - Toxocara canis, Toxocara cati – - Trichinella spiralis (svalovec stočený) •Filárie – - Loa loa (vlasovec oční)