Téma P01
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 9. 2012 Strana 1/3
Téma P01: Diagnostika stafylokoků
K nastudování: Rod Staphylococcus. (z internetu, učebnic apod.)
Z jarního semestru: Mikroskopie, Kultivace, Biochemická identifikace.
Úkol 1:Mikroskopie infekčního materiálu
V mikroskopu sledujte preparát obarvený podle Grama. Popište a zakreslete sledované útvary. Všímejte si
přítomnosti
bakterií (jejich
tvaru, barvitelnosti
a množství) dále
také leukocytů,
epitelií a
vzájemného
poměru mezi nimi.
Tabulka pro souhrn výsledků úkolů 2 až 7 (k postupnému vyplnění):
Kmen K L M N
Gramovo barvení –
Úkol 2
Úkol 3:
Kulti-
vace
(krevní
agar)
Velikost
Barva
Tvar
Profil
Hemo-
lýza
Jiné
Úkol 4: růst na KA
+ 10 % NaCl
Úkol 5: kataláza
(pište „+“ či „–“)
DÍLČÍ ZÁVĚR
Úkol 6a: Test
clump. faktor (+/–)
Úkol 6b: Plasmakoaguláz.
test (+/–)
Úkol 6c: Test
hyaluronidázy (+/–)
Úkol 7:
STAPHYtest 16
KONEČNÝ
ZÁVĚR
Pokud některý test u některého kmene neprovádíte, proškrtněte ho. Konečný závěr ale napište pro všechny.
Úkol 2: Mikroskopie kultur mikroorganismů
Obarvěte podle Grama čisté kultury předložených mikrobů. Výsledky pozorování zakreslete (↓) a zapište (↑).
Kmen K Kmen L Kmen M Kmen N
Popis (napište názvy útvarů a spojte je
šipkami s objekty nakreslenými vlevo)
Téma P01
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 9. 2012 Strana 2/3
Úkol 3: Růst na krevním agaru
Vyplňte tabulku na první straně v řádcích „Úkol č. 3“. Do „jiných“ napište to zajímavé, co se nevejde jinam.
Úkol 4: Růst bakterií na krevním agaru s 10 % NaCl
Zhodnoťte schopnost růstu předložených kmenů na krevním agaru s 10 % NaCl, který slouží jako selektivní
půda pro stafylokoky. Zapište „+“ pokud kmen roste a „–“ pokud neroste.
Úkol 5: Katalázový test
Prokažte přítomnost enzymu katalasy. Setřete mikrobiologickou kličkou kolonie předložených kmenů a vneste je
do kapky 3% H2O2 na podložním sklíčku. Zaznamenejte reakci u všech kmenů. Do tabulky pište „+“ a „–“.
Pozitivitu charakterizují _____________________, zatímco ____________________ je negativní.
Nyní vyplňte v tabulce řádek „Dílčí závěr“. Napište STAF, pokud se kmen ukázal býti
stafylokokem, a JINÝ, pokud je to něco jiného.
Úkol 6: Testy pro diferenciaci S. aureus
6a) Test na clumping faktor (test vázané plasmakoagulázy)
Na podložní sklíčko kápněte kapku ředěné králičí plazmy. Pomocí sterilní mikrobiologické kličky v ní
suspendujte vyšetřovaný kmen stafylokoka. Přítomnost plasmakoagulázy se projeví aglutinací bakteriálních
buněk. Výsledek vyšetření zakreslete a zapište sem i do tabulky.
6b) Plasmakoagulázový test (test volné plasmakoagulázy)
Do 0,5 ml 10× ředěné králičí plazmy bylo suspendováno několik kolonií vyšetřovaného kmene stafylokoka.
Suspenzi inkubujeme v termostatu při 37 °C. Výsledek se odečítá po 1, 2 a 24 hodinách. Jako pozitivní reakce se
hodnotí, pokud dojde ke koagulaci králičí plasmy ve zkumavce, tj. dojde k zrosolovatění celého obsahu
zkumavky, příp. alespoň části. Zapište a zakreslete výsledek této reakce u vybraných kmenů po 24 hodinách
inkubace. (Zkumavka je v nákresu záměrně nakloněná, aby bylo vidět, zda je uvnitř hladina tekutiny.)
6c) Detekce hyaluronidázy
Na krevní agar jsme naočkovali asi 2 cm široký pás Streptococcus
equii, bakterie, která tvoří silné pouzdro s obsahem kyseliny
hyaluronové. Kolmo k tomuto pásu byla naočkována čára
vyšetřovaného kmene stafylokoka. Pokud je příslušným kmenem
stafylokoka hyaluronidasa produkována, difunduje do okolí a do
druhého dne způsobí lýzu pouzdra Streptococcus equii. To se
projeví půlkruhovou zónou „ztráty slizovitosti“ v pásu
naočkovaného Streptococcus equii. Zakreslete výsledek reakce u
dvou kmenů (včetně pozitivní a negativní kontroly) a popište.
Pozor! V tomto úkolu nejde o hemolýzu kmenů. Do obrázku ji
sice – pokud ji pozorujete – můžete zakreslit, není to však pro
tento úkol podstatné. Dbejte pokynů učitele a úkol provádějte
až po jeho výkladu!
Kmen _____
(písmeno)
pozitivní – negativní
(škrtněte co neplatí)
Kmen _____
(písmeno)
pozitivní – negativní
(škrtněte co neplatí)
Pozitivní výsledek Negativní výsledek
Téma P01
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 9. 2012 Strana 3/3
Úkol 7: Bližší určení stafylokoků pomocí biochemického mikrotestu (STAPHYtest 16)
Pro identifikaci stafylokoků je určena sada biochemických testů. Podle tabulky v návodu k použití nebo podle
barevné srovnávací šablony odečtěte výsledky jednotlivých reakcí. Výsledky testů pro jednotlivé kmeny zapište
a na základě interpretačních tabulek zjistěte, o které druhy stafylokoků jde. Začátek výsledků pro první kmen
máte předvyplněn. Nezapomeňte vyplnit též procento pravděpodobnosti a index typičnosti!
Zkum. První řádek vlastního testu s 8 jamkami Druhý řádek vlastního testu s 8 jamkami
VPT 1H 1G 1F 1E 1D 1C 1B 1A 2H 2G 2F 2E 2D 2C 2B 2A
K + + + – – – + + –
1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2
7 0 3
Kód: Identifikace
Staphylococcus ___________
% pravděpod. T index
VPT 1H 1G 1F 1E 1D 1C 1B 1A 2H 2G 2F 2E 2D 2C 2B 2A
L +
1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2
7
Kód: Identifikace
Staphylococcus ___________
% pravděpod. T index
Úkol 8: Citlivost stafylokoků k antibiotikům
Zjistěte citlivost předložených kmenů stafylokoků k vybraným antibiotikům, pomocí diskového difusního testu.
Citlivost k předkládaným antibiotikům zhodnoťte na základě srovnání změřeného průměru inhibiční zóny
s příslušnou hraniční zónou. Seznam testovaných antibiotik a hodnoty jejich hraničních zón najdete v přiložené
tabulce. Výsledky testu pro jednotlivá antibiotika (průměr inhibiční zóny i interpretaci) zapište. V případě, že
zóna citlivosti není vůbec přítomna, proškrtněte průměr zóny a rovnou zapište „R“.
Antibiotikum (plný
název, ne zkratka)
S. aureus S. epidermidis
Průměr zóny (mm) Interpretace* Průměr zóny (mm) Interpretace*
*zapisujte C = citlivý, R = rezistentní, případně D = dubiózní (hraniční zóna, velikost právě rovna referenční)