Téma P02
Jméno _____________________ Směr všeobecný Datum ___. 9. 2012 Str. 1/4
Téma P02: Diagnostika streptokoků
K nastudování: Streptococcus (z učebnic, internetu…)
Z jarního semestru: Mikroskopie, Kultivace, Biochemická identifikace, Neutralizace
Tabulka pro souhrn výsledků úkolů 1 až 6 (k postupnému vyplnění):
Kmen K L M N P Q R S
Gramovo barvení –
Úkol 1
Kataláza – úkol 2a
Slanetz-Bartley
úkol 2b
Úkol 3
Kulti-
vace
(krevní
agar)
Velikost
Barva
Tvar
Profil
Změny
agaru
Jiné
DÍLČÍ ZÁVĚR
Úkol 4a: Optochin
(jen viridující str.)
4b: STREPTOtest
16 (jen ústní strep.)
Úkol 5a: PYR test
(jen hemolytické s.)
Úkol 5b: CAMP
(jen hemolytické s.)
Úkol 5c (jen nAnB)
Aglutinace
KONEČNÝ
ZÁVĚR
Úkol 1: Mikroskopie podezřelých kmenů
Na stole máte kmeny označené písmeny. Obarvěte je podle Grama a určete, který z nich není grampozitivním
kokem. Nátěry jednotlivých kmenů označte na sklíčku pomocí tužky na sklo příslušným písmenem. Výsledky
zapište do tabulky. U kmenů, které nejsou G+ koky, proškrtněte zbylou část tabulky.
Úkol 2: Základní kultivační a biochemické testy – rodové určení
a) Katalázový test k odlišení stafylokoků
Proveďte katalázový test se všemi kmeny z prvního úkolu s výjimkou toho, který jste v tomto úkolu vyřadili.
Stafylokoky jsou kataláza pozitivní, streptokoky a enterokoky negativní. Zapište do tabulky.
b) Růst na Slanetz-Bartleyově agaru k odlišení enterokoků
Na misce máte po výsečích naočkovány všechny kmeny. Roste však jen jeden. Tento kmen je enterokok, a není
tedy streptokok. Zapište výsledek do tabulky.
Úkol 3: Kultivace na krevním agaru
Na miskách s krevním agarem máte opět všechny kmeny. Ty, které jste vyloučili v úkolech 1 a 2, nemusíte
popisovat, pro porovnání se však na ně podívejte. Zapište vlastnosti kmenů do tabulky.
Nyní zapište do tabulky „dílčí závěr“. Ke každému z kmenů K až S zapište „NENÍ STR“ (není streptokok)
„HEMOL STR“ (částečná či úplná hemolýza) nebo „VIRID STR“ (streptokok s viridací)
Téma P02
Jméno _____________________ Směr všeobecný Datum ___. 9. 2012 Str. 2/4
KMEN __ KMEN __
Úkol 4: Bližší určení streptokoků s viridací
a) Optochinový test
Máte za úkol vyhodnotit optochinový test u dvou kmenů, které jste určili jako streptokoky s viridací.
Optochinový test je test, který se ničím neliší od běžného difúzního diskového testu až na to, že účinná látka
(optochin) se nyní už nevyužívá léčebně. Kmen s přítomností zóny inhibice růstu kolem disku je S. pneumoniae,
kmen bez zóny je „ústní streptokok“. Výsledek zakreslete a zapište do tabulky (tam stačí ve formě + / –)
+ = jakákoli zóna citlivosti (není nutno měřit) – = není zóna
b) Biochemické určení „ústního“ streptokoka
U kmene, který jste v předchozím úkolu určili jako „ústního“ streptokoka, druhově vyhodnoťte biochemický
mikrotest (STREPTOtest 16), využívajíce postupů, které znáte z jarního semestru.
Zkum. První řádek s osmi jamkami Druhý řádek s osmi jamkami
VPT 1H 1G 1F 1E 1D 1C 1B 1A 2H 2G 2F 2E 2D 2C 2B 2A
1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2
Kód: Identifikace
Streptococcus ___________
% pravděpod. T index
Úkol 5: Určování streptokoků s částečnou či úplnou hemolýzou
Tento úkol provádějte u tří kmenů, které jste určili jako streptokoky s betahemolýzou (části a, b); poslední část
(c) pouze u kmene, který určíte jako non-A-non-B streptokoka.
a) PYR test
PYR test je proužkový test, podobný oxidázovému. Při odečítání barevné reakce je však nutno asi pět minut
vyčkat, pak přikápnout kapku činidla pro PYR test a poté počkat další půlminutu. Pozitivní je zčervenání otisku.
Také tento test je pozitivní u S. pyogenes (a také u enterokoků). Negativní je Streptococcus agalactiae i non-Anon-B
streptokoky.
Poznámka: Někdejší bacitracinový test se dříve používal místo PYR-testu. Jeho princip je shodný s principem
optochinového testu, jen s jiným antibiotikem. Pro nedostatečnou specificitu byl již téměř opuštěn.
Vyplňte následující tabulku, včetně zakreslení výsledku PYR testu u všech tří testovaných kmenů.
Kmen (zapište písmeno) Kmen (zapište písmeno) Kmen (zapište písmeno)
Interpretace: negativní – pozitivní
(nehodící se škrtněte)
Interpretace: negativní – pozitivní
(nehodící se škrtněte)
Interpretace: negativní – pozitivní
(nehodící se škrtněte)
b) CAMP test
Poznámka: CAMP test nemá nic společného s cyklickým adenosinmonofosfátem. Nazývá se podle jmen svých
objevitelů. Proto se také píše CAMP test a nikoli cAMP test.
CAMP test je založen na hemolytickém synergismu mezi kmenem S. aureus produkujícím beta-hemolyzin a
kmenem S. agalactiae. Pozitivní výsledek má tvar dvou trojúhelníkovitých zón („motýlovitý tvar“) úplné
hemolýzy v místě překřížení obou kmenů. Malá zóna jiného tvaru se považuje za negativní výsledek. Negativní
je jak S. pyogenes, tak i non-A-non-B streptokoky. Nakreslete svůj výsledek do obrázku (na následující stránce):
Téma P02
Jméno _____________________ Směr všeobecný Datum ___. 9. 2012 Str. 3/4
c) Demonstrace aglutinačního testu k bližšímu určení zejména non-A-non-B streptokoků
U kmene určeného jako streptokok non-A-non-B by se mohlo provést určení séroskupiny aglutinací. Prohlédněte
si na obrázku z dataprojekce výsledek takové aglutinace a zakreslete. Poté zaznamenejte do tabulky výsledky
všech částí Úkolu č. 5, a zapište do tabulky definitivní závěr (určení jednotlivých streptokoků).
Úkol 6: Testy citlivosti na antibiotika u streptokoků
Vyhodnoťte testy citlivosti (difusní diskové testy) na antibiotika u těch kmenů streptokoků, které považujete za
patogeny či možné patogeny; předpokládejme pro jednoduchost, že se jedná o kmeny z horních cest dýchacích.
Do tabulky dopište zkratky antibiotik dle přiložené kartičky a pro všechny testované kmeny změřte zóny citlivost
v mm. Na kartičce jsou napsány hraniční zóny – podle nich interpretujte zóny vámi zjištěné jako citlivé (C),
rezistentní (R) a dubiózní (D). Dubiózní jsou zóny, jejichž průměr právě odpovídá referenční zóně.
Kmen 
Antibiotikum
(celý název)
zóny
(mm)
Interpr. zóny
(mm)
Interpr. zóny
(mm)
Interpr. zóny
(mm)
Interpr.
kmen ___
kmen ___ kmen ___
A B C D
F G
Téma P02
Jméno _____________________ Směr všeobecný Datum ___. 9. 2012 Str. 4/4
Úkol 7: Diagnostika pozdních následků streptokokových infekcí – vyšetření ASLO
Princip – opakování z J08: Protilátky brání hemolyzinu (streptolyzin O – antigen) hemolyzovat králičí
erytrocyty. Hladina ASLO se zvyšuje po nákazách vyvolaných hemolytickými streptokoky skupiny A (méně často i
jiných). Riziko pozdních následků streptokokových nákaz se projeví zvýšením ASLO nad 200 m. j.
(mezinárodních jednotek).
Na bočním stole naleznete ve vlhké komůrce destičku. Obsahuje pozitivní kontrolu a několik sér pacientů.
Určete hodnoty ASLO (hodnota ASLO odpovídá poslednímu ještě pozitivnímu důlku; pozitivita = zábrana
hemolýzy, negativita = hemolýza) a interpretujte z hlediska rizika pozdních následků streptokokové infekce.
Slovníček k dnešnímu tématu:
V tomto protokolu (a v některých učebnicích) V některých jiných učebnicích
viridace alfa-hemolýza
částečná hemolýza beta-hemolýza
úplná hemolýza
žádná hemolýza/nepřítomnost hemolýzy gama-hemolýza