Téma P05
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 10. 2012 Strana 1
Téma P05: Diagnostika Pasteurellaceae a G– nefermentujících tyčinek
Ke studiu: Haemophilus, Pasteurella, Pseudomonas a G– nefermentující tyčinky (učebnice, WWW atd.)
Z jarního semestru: Mikroskopie, kultivace, biochemická identifikace, antigenní analýza
Tabulka pro hlavní výsledky úkolů 1 až 5 (k postupnému vyplnění):
Kmen K L M N P Q R S
Gramovo barvení –
Úkol 1
Úkol
2
Kul-
tiva-
ce
Růst na KA
(A/N)
Růstové
charakteristiky
na
KA (ČA*)
Endova p.
(–/L-/L+#
)
MH agar
(barva)
Úkol 3a Satelitový
fenomén (+/–)
Úkol 3b Růstové f.
(X, V, X + V)
Úkol 3c Pouzderný
typ: Haemophilus
3d Test
citlivosti
Penicil.
Vanko.
Fermentace gluk.
Úkol 4 (Hajna)
Oxidázový test
Úkol 5a
NEFERMtest 24
Úkol 5b
KONEČNÝ
ZÁVĚR
*Pro bakterie nerostoucí na krevním agaru (KA) použijte čokoládový agar (ČA)
#
Neroste/roste a nefermentuje laktózu/roste a fermentuje laktózu
Úkol 1: Mikroskopie suspektních kmenů
Na stole máte kmeny popsané písmeny. Obarvěte je podle Grama, a do tabulky vepište výsledky. Kmen, který
NENÍ G– tyčinka, nebude studován v úkolech 3 až 5 (ale v Úkolu 2 si ho pro srovnání popište)
Úkol 2: Kultivace na agarových půdách
Nejdříve napište, které bakterie rostou na krevním agaru a které ne. Pak, používajíce standardních procedur,
popište kolonie všech kmenů na krevním agaru. Pouze ty, které na KA nerostou, popište na čokoládovém agaru.
Poté popište růst na Endově půdě (stačí „–“ pokud nerostou a „+“ pokud rostou; fermentaci laktózy nelze
posuzovat, neboť kmeny jsou naočkovány na osminy a netvoří izolované kolonie) a na MH agaru (jen „–“ nebo
„+“, a případně přítomnost specifického zbarvení).
Úkol 3: Identifikace Pasteurellaceae a jejich přesnější určení
a) Satelitový fenomén
Hemofily jsou typické takzvaným satelitovým
fenoménem. To znamená, že samy o sobě nerostou na
krevním agaru, ale jsou tam schopny růst v přítomnosti
kmene, který pro ně z krvinek uvolní růstové faktory. Pro
tento účel se zpravidla používá kmen Staphylococcus
aureus. Zakreslete satelitový fenomén a spojte popisky
s příslušnými jevy na obrázku
Staphylococcus aureus Kolonie hemofilů
Téma P05
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 10. 2012 Strana 2
b) Identifikace hemofilů podle potřeby růstových faktorů
Určete dané kmeny podle potřeby růstových faktorů. Zakreslete výsledek faktorového testu pro oba kmeny.
c) Detekce kapsulárních antigenů H. influenzae
Popište výsledek aglutinace kapsulárních antigenů H. influenzae pomocí latexové aglutinace (z prezentace).
d) Detekce P. multocida pomocí typického vzorce citlivosti
Velmi typická pro P. multocida je její citlivost k penicilinu, velmi vzácná u G– tyčinek. Na druhou stranu je
rezistentní k mnohem silnějšímu (ovšem pouze pro G+ bakterie vhodnému) antibiotiku vankomycinu. Zapište.
Úkol 4: Hajnova půda
Prohlédněte si kultivační výsledky čtyř kmenů na Hajnově půdě. Kmen, který fermentuje glukózu (žlutá barva)
označte jako „+“, kmeny nefermentující (červená) jako „–“
Úkol 5 Určení G– glukózu nefermentujících bakterií
a) Oxidázový test
Demonstrace oxidázového testu u tří kmenů určených jako G– nefermentující bakterie. Zapište výsledky do
tabulky. (Pseudomonas je vždy pozitivní, Burkholderia většinou, ale ne nutně pozitivní; na druhou stranu,
Stenotrophomonas bývá zpravidla negativní).
Oxidáza pozitivní bakterie s typickou vůní a pigmentem (zpravidla zeleným, řidčeji modrým či zrzavým) je
prakticky s jistotou Pseudomonas aeruginosa. U této bakterie tedy není nutno provádět další biochemické
testování, popsané v úkolu 5a. U ostatních dvou kmenů je toto biochemické testování nezbytné.
b) Podrobné biochemické testování
Vyhodnoťte předložené výsledky NEFERMtestu 24, který byl připraven DVA dny předem (rozdíl oproti jiným
biochemickým testům, kde je to jen jeden den) při 30 °C (další rozdíl; jiné testy vyžadují 37 °C). Také způsob
odečítání testu je jiný, protože zde máme tři řady. Testy v horní řadě mají vždy hodnotu „1“, v prostřední „2“ a
v dolní „4“. První číslice je z oxidázového testu: „0“ pro negativní, „1“ pro pozitivní oxidázu. Z reakcí v důlcích
B a A se číslice nevypočítávají. Máme tedy sedmimístný kód – první pozice je „0“ (oxidáza –) nebo „1“
(oxidáza +) a dalších šest může nabývat hodnot 0 až 7 dle výsledku testů ve sloupcích H až C.
Kmen: OX H G F E D C B A Kód:
1 Identifikace:
2 % pravděpodobn.:
4 Index typičnosti:
Kód
Kmen: OX H G F E D C B A Kód:
1 Identifikace:
2 % pravděpodobn.:
4 Index typičnosti:
Kód
Poznámky:
Téma P05
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 10. 2012 Strana 3
Úkol 6: Testy citlivosti patogenů na antibiotika
Mezi vašimi bakteriemi je pět patogenních: dvě z čeledi Pasteurellaceae a tři G– nefermentující. Zapište celé
názvy antibiotik a změřte velikost zón. Zapište kmeny jako citlivé (C) resistentní (R) a dubiózní (D). (Dubiózní
jsou ty, které mají velikost zóny právě hraniční.)
6a) Test pro Pasteurellaceae
Kmen 
Antibiotikum
(celé jméno)
zóny (mm) Interpr. zóny (mm) Interpr.
6b) Test pro G– nefermentující bakterie
Kmen 
Antibiotikum
(celé jméno)
zóny
(mm)
Interpr. zóny (mm) Interpr. zóny (mm) Interpr.
Úkol 7: Vztahy bakterií ke kyslíku – porovnání enterobakterií, G– nefermentujících a
anaerobů
Podívejte se na bujóny kultivované za aerobních a anaerobních podmínek (vrstva parafinu na povrchu),
vyhodnoťte růst bakterií a jeho charakter.
Kmen
Růst v bujónu
Růst ve VL bujónu
Závěr
Velké, splývající zóny není
potřeba měřit, hodnoťte
rovnou jako „citlivé“.