Téma P09
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 11. 2012 Strana 1/3
Téma P09: Diagnostika spirochetálních infekcí
K nastudování: Borrelia, Leptospira,Treponema (z učebnic, WWW atd.)
Z jarního semestru: Mikroskopie, PCR, průkazy antigenů a protilátek
Lymeská borrelióza
Společná tabulka pro úkoly 1, 2 a 3.
Písmeno
pacienta
Krátký klinický
popis
(1–3 slova
charakterizující
situaci)
ELISA (Úkol 1) W. blotting (Ú2) PCR
(Ú3)
(+/–)
Závěr:
konečná
interpretace, dopor.
případné léčby
IgM IgG IgM
(+/–)
IgG
(+/–)
Abs. (+/–) Abs. (+/–)
J
K
L
M
N
Úkol 1: Průkaz protilátek proti Borrelia garinii metodou ELISA
Odečtěte podle výkladu vyučujícího výsledek reakce u pacientů s podezřením na lymeskou borreliózu. Určujeme
protilátky ve třídě IgG a IgM. V poli A1 (odpovídá důlku A1 v mikrotitrační destičce) naleznete hodnotu CAL
(= v postatě cut-off; všechny hodnoty absorbance nad CAL jsou pozitivní, vše pod CAL budiž negativní).
V polích B1 a C1 jsou kontroly. Pacienti označení písmeny J až N jsou v barevně označených polích.
Zapište hodnotu CAL, zkontrolujte, jestli negativní a pozitivní kontrola je v pořádku. Pak odečtěte a vyhodnoťte
výsledky ELISA reakce pro pacienty No. J, K, L, M, N (ty nepište sem, použijte hlavní tabulku nahoře).
Hodnota CAL
(důlek A1):
Hodnota absorbance K+
(důlek B1):
 K+ je OK
 K+ není OK 
zaškrtněte,
co platíIgM Hodnota absorbance K–
(důlek C1):
 K– je OK
 K– není OK
Hodnota CAL
(důlek A1):
Hodnota absorbance K+
(důlek B1):
 K+ je OK
 K+ není OK 
zaškrtněte,
co platíIgG Hodnota absorbance K–
(důlek C1):
 K– je OK
 K– není OK
Úkol 2: Průkaz protilátek proti Borrelia garinii pomocí Western blottu
U pacientů řešených v úkolu č. 1 se vzorky séra či likvoru testovaly také Western blottem. Odečtěte výsledky dle
instrukcí. Pro odečtení reakce použijte kontrolní proužek. Diagnostické schéma je vždy stejné: ELISA je použita
ke screeningu, Western blot ke konfirmaci jejích výsledků. Odečtěte Western blot u pacientů J až N a zapište
výsledky do hlavní tabulky.
Úkol 3: Diagnostika Lymeské borreliózy pomocí PCR
Pomocí dané fotografie PCR produktu na agarózovém gelu zakreslete a zaznamenejte, který z testovaných
vzorků je pozitivní. PCR diagnostika se prováděla s ohledem na závažnost anamnézy pouze u dvou z pěti
řešených pacientů. Poté proveďte celkové zhodnocení všech tří úkolů a zapište závěr.
Syfilis
Úkol 4: Přímý průkaz syfilis.
Přímý průkaz syfilis je možný pouze v případě zaslání vhodných vzorků do laboratoře. V některých stádiích
nemoci však není k mání žádný vhodný vzorek pro tento účel.
a) Rabbit infectivity test – RIT
Zapište název králíka používaného pro tento test.
(Je odvozen z tohoto souostroví: .)
Exudát z podezřelého vředu je zpravidla vyhodnocován
zástinovou mikroskopií a očkován do králičích varlat.
Testované zvíře začíná trpět orchitidou 10 dní po
naočkování. Název králíka:
Téma P09
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 11. 2012 Strana 2/3
b) Mikroskopie v zástinu
Podívejte se na mikrofotografii treponemat ze zástinové mikroskopie, zakreslete princip zástinové mikroskopie a
zaznamenejte výsledek svého pozorování.
c) Přímá imunofluorescence
Podívejte se na mikrofotografii treponemat získanou z fluorescenčního mikroskopu a zaznamenejte výsledek.
4b) princip 4b) výsledek 4c)
Původce syfilis, Treponema pallidum subsp. pallidum, NENÍ kultivovatelný organismus. Diagnostika závisí na stádiu nemoci.
Nepřímý průkaz syfilis
Společná tabulka pro úkoly 5 a 6.
Písmenopacienta
Krátká
klinická
charakterizace případu
Úkol 5
screening
Úkol 6
konfirmace Závěr:
konečná interpretace,
doporučení případné léčby
RRR
TPHA
FTA-ABS
ELISA WB
IgM
IgG
IgM(+/–)
IgG(+/–)
Absor-
bance
(+/–)
Absor-
bance
(+/–)
A
B
C
D
E
Úkol 5: Screening syfilis – RRR a TPHA
Těhotné ženy a dárci krve jsou screeningově vyšetřováni rychlou reaginovou reakcí (RRR) a Treponema
pallidum pasivní hemaglutinací (TPHA). Posuďte výsledky screeningu u předložené skupiny osob a stanovte, u
koho je třeba ještě zajistit podrobnější, tzv. konfirmační (potvrzovací) vyšetření. Výsledky zapište přímo do
tabulky.
RRR: pozitivní je vyvločkování. TPHA: pozitivní je tvorba aglutinátu. Více viz praktikum J07.
Úkol 6: Konfirmace syfilis – FTA-ABS, ELISA a Western blotting
Vyhodnoťte výsledky FTA-ABS, ELISA a western blottingu (WB) u pacientů se suspektní syfilis (viz předchozí
úkol). Spočítejte cut-off a porovnejte s ním hodnoty pozitivní a negativní kontroly a výsledky pacientů.
V poli/důlku A1 je přítomen blank.
Hodnota cut off
(C1 + D1) / 2
Hodnota absorbance K–
(pole/důlek B1):
 K– je OK
 K– není OK 
zaškrtněte,
co platíIgM Hodnota absorbance K+
(pole/důlek E1):
 K+ je OK
 K+ není OK
Hodnota cut off
(C1 + D1) / 2
Hodnota absorbance K–
(pole/důlek B1):
 K– je OK
 K– není OK 
zaškrtněte,
co platíIgG Hodnota absorbance K+
(pole/důlek E1):
 K+ je OK
 K+ není OK
Téma P09
Jméno _____________________ Všeobecné lékařství Datum ___. 11. 2012 Strana 3/3
Leptospiróza
Úkol 7: Přímý průkaz Leptospira sp.
Podle daného obrázku popište a zakreslete morfologii leptospir kultivovaných na tekutém Korthoffově médiu po
dva týdny. Pro test byla použita moč pacienta s podezřením na leptospirózu.