Téma 08:               Pozorování prorůstání pylových láček

na roztlakových preparátech čnělek


Hodnocení růstu pylových láček čnělkou je důležité především při hybridizačních experimentech. Před
barvením se čnělky fixují a macerují, aby bylo možné roztlačení jejich pletiv do jedné vrstvy.
Intenzita a doba macerace závisí na konzistenci čnělky. Roztlačování provádíme v roztoku barviva
selektivně barvícího kalózu v pylových láčkách.


Materiál: pestíky lilie (Lilium hybr.)

Vzorky čnělek s bliznami:
 1. blizna opylená pylem z květu jiné rostliny (odběr 5 dní po opylení)
 2. blizna opylená květem z jiného květu stejné rostliny (odběr 5 dní po opylení)
 3. blizna - neopylená kontrola
 4. blizna opylená pylem stejného květu (odběr 15 hodin po opylení)
 5. blizna opylená pylem stejného květu (odběr 15 hodin po opylení)
 6. blizna staršího květu – neopylená kontrola
 7. blizna staršího květu – neopylená kontrola


fixáž: ethanol – octová (70% EtOH : ledová kyselina octová  1:1) – fixováno 2011 po dobu 24 hod.

oplach a uložení v 70% EtOH     4 dny   (10. – 14.11.2011)

projasnění, macerace a barvení podle protokolů A a B  (v praktiku 2011)

60% kyselina mléčná

barvení: 1% roztok bavlníkové modři (anilin blue) v laktofenolu (fenol, kyselina mléčná, glycerol,
voda - v poměru 2 : 1 : 2 : 1)

opláchnutí barviva a uložení do roku 2012 - koncentrovaná kyselina mléčná


A.     Barvení pylových láček v čnělce po maceraci vroucí vodou

Postup:

1.        Fixace čnělky v ethanol – octové fixáži 30 minut až několik hodin.

2.        Macerace ve vroucí vodě 5 – 10 minut, silnější a tvrdší čnělky až 25 minut.

3.        Projasňování v 60% kyselině mléčné asi 30 min. při teplotě 60^oC.

4.        Barvení ve směsi barviva 30 – 60 min. při teplotě 60^oC.

5.        Opláchnutí barviva v kyselině mléčné a uzavření čnělky pod krycí sklo do kyseliny mléčné.

6.        Roztlačení pletiv jemným tlakem na krycí sklo.


B.     Barvení pylových láček v čnělce po maceraci v 1N HCl

(podle doporučení prof. Bohdana Rodkiewicza, Univerzita M.C. Sklodowské, Lublin, Polsko)


Postup I.:

1.        Fixace čnělky v ethanol – octové fixáži 30 minut až několik hodin.

2.        Macerace v 1N-HCl asi 10 minut.

3.        Důkladné promytí vodou.

4.        Barvení ve směsi barviva 30 – 60 min. při teplotě 60^oC.

5.        Opláchnutí barviva v kyselině mléčné a uzavření čnělky pod krycí sklo do kyseliny mléčné.

6.        Roztlačení pletiv jemným tlakem na krycí sklo.


Výsledek:

Pylové láčky se barví intenzivně modře ve srovnání s okolními pletivy.


Hodnocení:

Preparát pozorujeme v procházejícím světle. Srovnáme a vyhodnotíme výsledky obou postupů barvení.



Literatura:

Lux, A., Erdelská, O. (1998): Praktikum z anatómie a embryológie rastlín. Bratislava : Univerzita
Komenského, 135 s. ISBN 80-223-1229-0.