5. Cvičení
sklíčkové kultury
Ivana Ščigalková
Sklíčkové kultury
 Pro pozorování hyf a rozpadajících se
vláken u nokardioformních aktinomycet a
streptomycet (při odebírání z kolonie na sklíčko a
pozorování pod mikroskopem se mycelium většinou
poškodí a nelze jej sledovat v původní podobě)
 Aktinomycety a streptomycety mohou tvořit
substrátové a/nebo vzdušné mycelium,
jejich kolonie jsou charakteristické:
– většinou drsný, vrásčitý povrch
– pigmentace
1. Vlhké komůrky – kultivace na
podložním sklíčku
 Pracujeme ve FLOW-BOXU, asepticky!!!
 Na sterilní Petriho misky s kuličkami a podložním
sklem vyžíhaným skalpelem umístíme tenký
čtvereček agaru (médium dle mikroorganismu).
Vyžíhanou kličkou zaočkujeme podél okrajů,
překryjeme sterilním krycím sklíčkem. Pod
podložní sklíčko (na kuličky) sterilni pasteurkou
napipetujeme cca 5ml sterilní destilované vody.
Misku popíšeme a kultivujeme při 30 C 3-5dní.
1. Vlhké komůrky – kultivace na
podložním sklíčku
 Pozorujeme
– nárůst na sklíčku
– Nomarského
kontrast
– zvětšení 400x
2. Kultivace na krycím sklíčku
 Do agaru na PM (medium dle očkovaného kmene)
vyžíhanou pinzetou pod úhlem 45 zapíchneme
sterilní krycí sklíčko. Kulturu naočkujeme z horní
strany podél žlábku.
 Substrátové mycelium prorůstá agar, vzdušné
roste po sklíčku. Kultivujeme 3-5 dní.
 Před pozorováním výsledků vytáhneme sklíčko a
označíme horní stranu tečkou! – rozpoznání
vzdušného a substrátového mycelia.
2. Kultivace na krycím sklíčku
 Pozorujeme
– sklíčko s narostlou
kulturou položíme
nárustem dolů na
podložní sklíčko.
– Nomarského
kontrast
– zvětšení 1000x s
imerzí
Streptomyces griseus ssp. Griseus
CCM 3362
 trvalá vlákna, vzácně
rozpadavá
 větvené mycelium
 spory v řetízcích
(druhově specifické),
nepohyblivé
 neacidorezistentní
Streptomyces griseus ssp. Griseus
CCM 3362
Kultivace na krycím sklíčku;
zv. 1000x
Kultivace na podložním
sklíčku ve vlhké komůrce;
zv. 400x
•Větvené
vzdušné
mycelium
•Substrátové
mycelium
•Řetízky
spor
 mírně nebo silně větvená
vlákna substrátového
mycelia
 tvoří i vzdušné mycelium
 mycelium u starších kultur
rozpadavé do tyčkovitých
až kokovitých částic
 acidorezistence 2.stupně
Nocardia carnea CCM 2756
Kultivace na podložním
sklíčku ve vlhké komůrce;
zv. 400x
Kultivace na krycím sklíčku;
zv. 1000x
•Rozpadavé
vzdušné
mycelium
•Substrátové
mycelium
Nocardia carnea CCM 2756
 tyčinky, někdy silně
větvené substrátové
mycelium rozpadavé do
krátkých tyček, koků
 vzdušné hyfy výjimečně
 acidorezistence 2.stupně
 kolonie:
– drsné, ale i hladké,
mukózní (obzvlášť z
klinického materiálu)
– pigmentace žlutohnědá,
oranžová, smetanová
Rhodococcus erythropolis
CCM 277
Kultivace na podložním
sklíčku ve vlhké komůrce;
zv. 400x
Kultivace na krycím sklíčku;
zv. 1000x
•Substrátové
mycelium
•Úlomky
mycelia
Rhodococcus erythropolis
CCM 277