Průběh NASBA
RNA matrice
5´
3´
DNA primer A s promotorem pro T7 RNA-polymerázu
T7

Průběh NASBA
RNA matrice
5´
3´
Zpětná transkriptáza
T7

Průběh NASBA
RNA matrice
5´
3´
RNáza H – degradace RNA
T7
5´
3´

Průběh NASBA
DNA primer B
T7
5´
3´
Vznikla dsDNA s promotorem pro T7 RNA polymerázu

Průběh NASBA
T7
5´
3´
Vznikla dsDNA s promotorem pro T7 RNA polymerázu
3´
5´
Transkripce T7 RNA polymerázou
3´
5´
3´
5´
A tím skončil první „cyklus“

Průběh NASBA
3´
5´
Produkty RNA z 1. cyklu
DNA primer B
5´
3´

Průběh NASBA
3´
5´
Produkty RNA z 1. cyklu
zpětná transkriptáza
5´
3´

Průběh NASBA
3´
5´
RNáza H
5´
3´

Průběh NASBA
primer A
5´
3´
T7
Vznikla dsDNA s promotorem pro T7 RNA polymerázu
3´
5´
Transkripce T7 RNA polymerázou
3´
5´
3´
5´
A vracíme se zase na začátek …

Vylepšené přístupy
ØK molekulám RNA jsou připojovány molecular beacons, což zvyšuje citlivost reakce


Praktické využití?
ØMolekulární diagnostika lidského papilomaviru
ØDetekce rezistence k azidotyminu u viru HIV-1
ØDetekce obtížně kutivovatelných bakterií (Chlamydia trachomatis, Mycobacterium tuberculosis)