Gly Ala Val Leu Ile Trp Phe Tyr Ser Thr Cys Met Asp Glu Asn Gln Lys Arg His Pro SeCys C H C H 2 H 3 C H 3 C PŘEHLED AMINOKYSELIN jednopism AA JEDNO- A TŘÍPÍSMENNÉ ZKRATY AMINOKYSELIN }I. DISOCIACE KARBOXYLOVÉ SKUPINY A AMINOSKUPINY } } pKa1 pKa2 } } R‑CH‑COOH Û R‑CH‑COO‑ Û R‑CH‑COO‑ } ½ ½ ½ } NH3+ NH3+ NH2 } } } } II. DISOCIACE BOČNÍHO ŘETĚZCE pKa3 1. -R nedisociuje 2. -RH Û -R‑ KYSELÉ AK: protonovaná forma je nenabitá 3. -RH+Û -R BAZICKÉ AK: protonovaná forma je kladně nabitá Typ disociace bočního řetězce a jeho náboj při daném pH lze rozlišit pouze na základě znalosti jeho chemické struktury!!! DISOCIACE AMINOKYSELIN } AK pKa1 pKa2 pKa3=pKa bočního řetězce }Ala 2.3 9.9 }Gly 2.4 9.8 }Phe 1.8 9.1 }Ser 2.1 9.2 }Val 2.3 9.6 }Asp 2.0 10.0 3.9 ‑COOH }Glu 2.2 9.7 4.3 ‑COOH }His 1.8 9.2 6.0 ‑imidazolium }Cys 1.8 10.8 8.3 ‑SH }Tyr 2.2 9.1 10.9 ‑fenol }Lys 2.2 9.2 10.8 ‑NH3+ }Arg 1.8 9.0 12.5 ‑guanidinium }Asn 2.0 8.8 }Gln 2.2 9.1 }Trp 2.4 9.4 }Leu 2.4 9.6 }Ile 2.3 9.6 }Met 2.3 9.2 }Thr 2.2 9.1 }Pro 2.0 10.6 DISOCIAČNÍ KONSTANTY AMINOKYSELIN TITRAČNÍ KŘIVKA GLYCINU titrgly PŘEHLED MONOSACHARIDŮ sacharidy přehled disacharidy VYBRANÉ DISACHARIDY aldosy uzav cyklu UZAVÍRÁNÍ CYKLU: ALDOSY ketosy uzav cyklu UZAVÍRÁNÍ CYKLU: KETOSY VYBRANÉ CHEMICKÉ VLASTNOSTI MONOSACHARIDŮ monosach chem vl PRIMÁRNÍ STRUKTURA NUKLEOVÝCH KYSELIN NK primstr1 NK primstr2 G Gly Ala Val Leu Ile Trp Phe Tyr Ser Thr Cys Met Asp Glu Asn Gln Lys Arg His Pro SeCys C H C H 2 H 3 C H 3 C PŘEHLED AMINOKYSELIN }Provede se štěpení před: }G (DMS/DT) }G+A (H+/DT) }C (hydrazin, 5M NaCl) }C+T (hydrazin) } }Příklad: } 5´ 3´ }32P-TGTAGGAGCT } }Štěpení před G (DMS/DT) vede ke vzniku fragmentů: }32P-TGTAGGAGCT }32P-TGTAGGAGCT }32P-TGTAGGAGCT }32P-TGTAGGAGCT } }K jiným souborům fragmentů povedou štěpení před G+A, před C a před C+T. } } } } } MAXAM-GILBERTOVA METODA SEKVENOVÁNÍ NUKLEOVÝCH KYSELIN MAXAM-GILBERTOVA METODA SEKVENOVÁNÍ NUKLEOVÝCH KYSELIN DETEKCE FRAGMENTŮ SEPAROVANÝCH ELEKTROFORÉZOU NA FOSFOIMAGERU (detekce radioaktivity - vizualizovány jsou pouze 32P značené fragmenty) G+A G C+T C ________________________________ start ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____