Ukázky: CCM katalog Anaerostat + generátor anaerobní atmosféry Plastové kličky Termostat se třepačkou Očkovania kultivace Bakteriální druh = jasně vymezená skupina navzájem příbuzných kmenů, zahrnujících typový kmen = sdílí 70% a vyšší DNA-DNA homologii komplementárních párů bazí (DNA reasociace) = vykazuje, až na výjimky, shodné fenotypové znaky a současně má některé odlišné znaky od jiných skupin Kultura = MO kultivované za laboratorních podmínek Preočkovaní = přenos inokula do čerstvého média za účelem pomnožení, izolace, oživení, přečištění,... Izolace - pomocí křížového roztěru, selektivních médií Bakteriální kolonie = klon jedné buňky Kultivace - různé podmínky (izolát, sbírkový či průmyslový kmen) — Statická x kontinuální (ubývání živin, přibývání metabolitů,..) x submerzní=třepaná, vzdušněná • Kultura - čistá x smíchaná x technická či průmyslová • Zisk čisté kultury -> selektivní médium, křížový roztěr • Křížový roztěr = postupné zřeďování původní kultury za účelem zisku jednotlivých kolonií (http://old.lf3.cuni.cz/mikrobiologie/bak/uceb/obsah/ockovani/ockovani. htm) • Kultivace - co nej rychlejší (zejména klinické izoláty, epidemiologie) či za účelem zisku biomasy • odběr vzorků (sterilita x půda x vody) - záleží i na zpracování vzorku • CFU - colony forming units = KTJ - kolonie tvořící jednotky • Názvosloví - stafylokok x Staphylococcus • Izolace - Proč? Jak? Pivovarské kvasinky Mlékárenské kultury Bwi^rat aneoool ac«ii*! w»r P*Unetvn Lsvu™ *ot*ro spAoatornantconcua pouf (left M&ns tvpa PCs, DOSIS * GEBRUIIt: Vaai 20 I N*r. Lh ep in 100 ml lauw wittr {30'CI. lint 10 min. «tun. omroarwt «n m hu! »rtrfl to«w>*0iit, tdul* tlfnparvtuur a 12 - 15X POSE <■ USAGE: Pour »ihm d* bl»r*. A*OUt*l4 1W>ml d'MU MM* (J0'C>. Ijimc: npwtr 10 mkv mnuoi «I jjoutei tu niöüt Tnrip*raturv Mtal* (!• tanrwn-tili«) I 12 - 1S*t- S ln»i«nf J Corrtetiu ; 12 g '-I'." S, A utabw frrant Iff voir versa ^ IJRE.VVFERM PRODUCTS E=F IHUI . . _ .l«_ -----• - - ■ —^■■^mafa^j^,» kun Očkování-čerstvé médium -> pomnožení, přečištění, izolace, oživení kultury •STERILITA!!!!! Vzduch, ruce, dech, pracovní plocha •„Mikrobiologický perník" z Tvrdého 14 a z internetu Kultivace - zisk kolonie MO = klony jedné buňky -> vzhled je závislý na typu média, kultivaci, stáří kultury •£. coli na krevním agaru E.coli na EMB agaru • Kultivace - je předstupeň izolace, identifikace, stanovení citlivosti na ATB, atd. • většina vzorků je nekultivovatelných • CCM - z katalogu; izolát - odvodit podmínky pro růst - LIŠÍ SE od přirozeného výskytu (charakter růstu i vzhled) • na misce/ v médiu - buňky v různé fázi růstu -> růstová křivka (i DIAUXIE) Počet buněk/délka růstu 1 - lag fáze; 2 - fáze zrychlujícího se růstu; 3 - exponenciální fáze růstu; 4 - fáze zpomaleného růstu; 5 - stacionární fáze růstu; 6 - fáze odumírání • Diauxie - postupné využití substrátu (např. nejdříve využije jednoduchý zdroj - glukóza->první vrchol; potom teprve nastartuje metabolizmus k využití složitějšího substrátu -laktóza ->druhý vrchol) 0 Z 4 e e Time (hours) • !!!!! STRIKTNÍ X TOLERANTNÍ!!!! • nároky na 02 aerofilní mikroaerofilní fakultativně anaerobní anaerobní (anaerostat, vrstva parafínu, svíčka,..) kapnofilní aerotolerantní • nároky na teplotu psychrofilní (pod 2o°c) mezofilní (20-40°c) termofilní (nad 40°C, optimum cca 50°C, extrém až 100°C) • nároky na tlak - barofilní, barotoleratní • nároky na redoxpotenciál, pH • nároky na živiny zdroj uhlíku heterotrof - organické látky autotrof- C02 zdroj energie fototrof - světelná energie organotrof-organické látky Micro-organisms require comprise bulk of Source of Carbon Source of Energy can be can be Single-celled organisms or cell clusters The Tree of Life Organic C02 Chemical Sun- carbon (inorganic) Energy Light include Animals 7 include micro-organisms such as Three Branches is used by Heterotrophs Autotrophs is provided by Chemotrophs Chemo- auto-lithotrophs might be able to survive \ is used by i "Green algae" Fungi Phototrophs Purple & green bacteria Slime molds BACTERIA ARCHEA have i ncIude Oxidation-Reduction Reactions have have been discovered Deep inside Martian Crust Deep inside Earth 's Crust i n w h i c h give up 1 Electrons ~—r~ shift from Chlorophyll converts produces i_. \ Cyano-bacteria have Cells Cells WITH WITHOUT a nucleus a nucleus \ are '. are Green Pigment were i rn port ant to 10 to 100 pmeters in diameter Light ACOZ Oxygen into sugar (02) Potential Energy e.g. Hydrogen -T- to \ duri ng e.g. Oxygen by aur w changed greatly in amount during 1 to 10 ^meters in diameter Evolution of Life on Earth Photosynthesis Uchování- šikmé agary, misky (4°C)- vysychání, kondenzující voda - kultivace dnem vzhůru! - glycerol, lyofilizáty (prášek vzniklý mražením kultury ve vakuu), zamražené v glycerolu Postup •MVyhodnocení z minulého cvičení (kontaminace ano x ne??)!! •Aseptická práce!! Žíhat hrdla a klíčky!!! Misky otevírat co nejméně!!! •POPSAT SI SKLO (datum jméno,kultura) •Vyžíhat kličku a nechat zchladnout •„hádek" na šikmý agar odspodu •Tekuté půdy-těsně nad okraj hladiny, na stěnu zkumavky, postupně vmíchat do média (osmotický šok) •Petriho miska - křížový roztěr (lx čistá + lx směsná kultura G+ a G-) •Petriho miska - rozdělit na čtvrtiny -> „hádkem" od okraje ke středu •Kultivace v termostatu 30°C po dobu 24-48 hod (do příštího cvičení se nechají při pokojové teplotě) Křížový roztěr (Streak Plate) Kultury ve cvičení G- • Escherichia coli CCM 3954 • Pseudomonas putida • Serratia marcescens CCM 303 G+ • Kocuria rosea CCM 839 • Micrococcus luteus CCM 169 • Bacillus cereus CCM 2010 • Staphylococcus aureus SA 812 kvasinky • Saccharomyces cerevisiae