Enterobakterie P04 Rod Enterobacteriaceae  Enterobacteriaceae je klinicky nejdůležitější čeleď gramnegativních tyčinek  Gramnegativní tyčinky, většinou pohyblivé (až na Shigella, Klebsiella a Y. pestis)  Oxidáza negativní, (kataláza +)  Biochemicky značně aktivní (záleží na patogenitě)  Komenzálové, saprofyté či patogeny střevní i mimostřevní (obligátní i oportunní patogeny) Primární patogeny z řad enterobakterií  Nejhorší patogeny způsobují celkové infekce: -Yersinia pestis (mor) - antropopatogenní serovary salmonel (serovary Typhi, Paratyphi A, Paratyphi B a Paratyphi C – břišní tyfus)  Závažné jsou ale i obligátní patogeny působící zpravidla „jen“ střevní infekce. I u nich je však riziko sepse, hlavně u oslabených osob  Týká se to rodů Salmonella, Shigella a Yersinia www2.mf.uni-lj.si Podmíněně patogenní enterobakterie  Escherichia  Klebsiella  Proteus  Serratia  Enterobacter  Atd. Yersinia pestis  Původce moru  Přenašečem je blecha morová (Xenopsylla cheopsis), zdrojem jsou krysy, potkani, popřípadě jiní hlodavci  Tři formy onemocnění:  Dýmějový (bubonický)  Plicní forma  Septická forma Další druhy – Y. enterocolitica, Y. pseudotuberculosis - onemocnění zažívacího traktu Mor (Yersinia pestis) www.emedicine.com dermatology.about.com www.arrakis.es Zoopatogení salmonely  Patří mezi nejběžnější původce bakteriálních střevních nákaz (tzv. salmonelózy)  Sérovary Enteritidis, Typhimurium, Infantis atd.  Fekálně- orální infekce– kontaminované potraviny  Rezervoárem infekcerůzní obratlovci Antropopatogenní serovary  Sérotypy Typhi, Paratyphi  Septická onemocnění- původci břišního tyfu (popř. paratyfů)  Vstupní branou infekce je trávicí trakt, zdrojem nákazy je jen člověk  Příznaky- vysoká horečka a bolest hlavy (hlavnička) Salmonela Endo MAL XLD www.medmicro.info Poznámka k salmonelám a shigelám  Salmonely potřebují vysokou infekční dávku. Musí se tedy pomnožit v nějaké potravině. Infekce jsou téměř výhradně z potravin.  Shigelám (původci tzv. bacilárních úplavic= nemoc špinavých rukou) naproti tomu stačí malá infekční dávka (asi 100 bakterií), takže se snadno přenesou špinavýma rukama, klikou od záchodu nebo kontaminovanou vodou. Escherichia coli  Je jednou z nejdůležitějších součástí střevní mikroflóry, kde je zdraví prospěšná  Může však i škodit, a týká se to hlavně specifických kmenů:  ve střevě EPEC (enteropatogenní EC)především u novorozenců  ETEC (enterotoxické EC)- cestovatelské průjmy  EIEC (enteroinvazivní EC)  STEC (shiga-like toxigenní EC)- hemolytickouremický syndrom  UPEC (uropatogenní EC)- mimo střevo  Extraintestinální (močové, septická onemocnění, infekce ran) a intestinální infekce (průjmy) E. coli http://www.biotox.cz res2.agr.ca my.opera.commy.opera.com www2.mf.uni-lj.si Rod Klebsiella  G- opouzdřené bakterie  Nejvýznamnějším druhem je K. pneumoniae  Významné nozokomiální patogeny - infekce močových cest - bronchopneumonie Proteus (P. mirabilis, P. vulgaris) •Původci močových infekcí •Pro protey je typické, že nerostou jen v místě inokulace, ale šíří se po povrchu agaru do stran (plazivý růst, Raussův fenomén, také fenomén příbojové vlny) www.medmicro.info Přehled enterobaktérií Patogenita Příklady Systémová Y. pestis, AP** salmonely Střevní ZP* salmonely, shigely, yersinie Potenciální E. coli, Klebsiely, enterobaktery, protey, providencie, morganely, citrobaktery, serracie a jiné Téměř nulová Mnoho druhů, například Pragia fontium a Budvicia aquatica *zoopatogenení **antropopatogenní Campylobacter jejuni  gramnegativní zahnutá tyčinka vyžadující speciální kultivaci  Nepatří mezi enterobakterie, ale kampylobakterióza je svým průběhem a závažností srovnatelná se salmonelózou  Počet případů u nás je v posledních letech přibližně stejný jako v případě salmonelózy www.cdc.gov Helicobacter pylori  Peptické (tedy gastrické či duodenální) vředy jsou onemocněním, které vzniká souhrou více příčin. Takovým onemocněním říkáme obvykle multifaktoriální.  Dodnes se nejen mezi praktickými lékaři, ale i mezi specialisty liší názory na podíl bakterie Helicobacter pylori na vředové onemocnění. Jisto je, že jsou i zdraví lidé s helikobakterem, stejně tak je ale jisto, že helikobakter svůj, nikoli nevýznamný, podíl na onemocnění má. http://vietsciences.free.fr Jak přežívá v extrémně nepříznivém prostředí žaludku?  Upravuje si své mikroprostředí – alkalizuje si ho tím, štěpí močovinu (silná ureázová aktivita)  Močovina se rozštěpí na kyselý oxid uhličitý, který vyprchá, a zásaditý amoniak, který zůstane a alkalizuje prostředí  Štěpení močoviny probíhá podle reakce: NH2-CO-NH2 + H2O  CO2 + NH3 Úkol 2:Kultivace  Popište kolonie všech kmenů na KA a Endově půdě. Zvláště si všimněte toho, že některé z nich jsou laktóza negativní a jiné laktóza pozitivní Foto O. Z. Úkol 3a- Hajnova půda  Barva spodní části půdy beze změny: bakterie nefermentuje glukózu (rozdíl tzv. G- nefermentující tyčky × enterobakterie)  Spodní část zčerná – tvorba H2S  Půda potrhaná, s bublinkami – tvorba plynu z glukózy  Dolní část žlutá, horní červená – bakterie fermentuje glukózu, ale ne laktózu  Půda celá žlutá – fermentuje i laktózu Úkol 4a – kultivační diagnostika enterobakterií  Na půdě XLD  salmonely mají bledé kolonie s černým středem (trochu jako malininkaté volské oko s černým žloutkem)  jiné bakterie buď nerostou vůbec, nebo rostou málo a v koloniích jiné morfologie  Na půdě MAL to vypadá podobně, ale některé barvy či velikosti kolonií se mohou lišit od výsledku na XLD Salmonela na MAL agaru www.medmicro.info Úkol 4b – biochemické testování enterobakterií  Pro biochemické testování enterobakterií používáme různé testy. V Česku používáme nejčastěji EnteroTest 16 a EnteroTest 24. My dnes použijeme první z nich  První reakce je ONPG test (zkumavka s činidlem na stripu, jako VPT ve StaphyTestu a StreptoTestu). První řada panelu odpovídá 2. až 9. reakci, druhá řada je 10. až 17. reakce. 5b Aglutinace salmonel  Při aglutinaci kterékoli pohyblivé enterobakterie hodnotíme dva typy antigenů: tělové, tzv. O antigeny, a bičíkové, tzv. H antigeny (výjimečně i kapsulární K antigeny).  Tak i každá salmonela má svou specifickou antigenní strukturu. Například salmonela serovaru Enteritidis disponuje tělovými antigeny (O) 9, 12 a bičíkovým H m.  Je-li tedy naše salmonela Salmonella Enteritidis, musí být pozitivní (aglutinace přítomna) jak při aglutinaci tělových, tak i bičíkových antigenů. Úkol 6 – testy antibiotické citlivosti  Antibiotická citlivost se zásadně neurčuje u kmenů ze stolice. (U bakteriálních průjmů většinou podání antibiotik paradoxně prodlužuje dobu vylučování patogena ze střeva; spíše než antibiotika se tedy užívá dieta a v rekonvalescenci probiotika.)  Určuje se tedy zpravidla u kmenů z moče, proto i antibiotika zahrnují léky používané k léčbě močových infekcí (např. furantoin) Tabulka zón citlivosti – test G1 (základní) Antibiotikum Zkratka Referenční zóna Ampicilin (rozšíř. penic.) AMP 17 mm Cefalotin (CS 1 gen) KF 18 mm Doxycyklin (tetracyklin) DO 16 mm Cefuroxim (CS 2 gen) CXM 23 mm Ciprofloxacin (chinol 3G) CIP 21 mm Ko-trimoxazol (směs) SXT 16 mm Kyselina oxolinová*(ch1G) OA 19 mm *alternativně norfloxacin (NOR) Úkol 7: Diagnostika kampylobaktera  Kampylobaktera si s předchozími bakteriemi nespletete. Neroste na běžných půdách, navíc jde o zahnutou tyčinku  Prohlédněte si kultivační výsledky kultivace kampylobaktera a zapište popis do protokolu  Prohlédněte si také oxidázový test (provede jej učitel demonstračně na bočním stole) Několik poznámek k diagnostice kampylobakterů  Kampylobaktery vyžadují v zásadě čtyři věci:  Svoji černou půdu –říkáme jí běžně „půda pro kampylobaktery“  Zvýšenou teplotu na cca 42 °C. Jsou to totiž primárně ptačí patogeny a ptáci mají vyšší tělesnou teplotu  Zvýšenou tenzi CO2  Prodlouženou dobu kultivace – nikoli 24, ale 48 hodin