Stanovení koncentrace DNA a RNA pomocí mikrofluorometru
Materiál:
 Quant-iT™ dsDNA BR Assay Kit, Quant-iT™ ssDNA BR Assay Kit, Quant-iT™ RNA Assay Kit
 Standardy dsDNA, ssDNA a RNA
 Vzorek dsDNA, ssDNA a RNA o neznámé koncentraci
 Real-time PCR mikrozkumavky
 Mikrofluorometr Qubit™ (Invitrogen)
Postup:
1. Připravte si cca 1 ml Working solution smícháním Quant-iT™ reagent a Quant-iT™ buffer
v poměru 1:200 zvlášť pro ssDNA, dsDNA a RNA
2. Připravte standardy smícháním 190 µl Working solution + 10 µl příslušného standardu #1 a #2
3. Připravte vzorek o neznámé koncentraci ve dvou mikrozkumavkách smícháním 195 µl Working
solution + 5 µl vzorku
4. Standardy i vzorky krátce promíchat na vortexu (2-3 sec), opatrně - ve vzorku nesmí být bublinky!!
5. Inkubace 5-10 minut při laboratorní teplotě
6. Zapnout Qbit fluorometr, vybrat příslušnou metodu, nová kalibrace (standardy), poté změřit
neznámý vzorek (2 x 3 měření)
7. Jaké jsou koncentrace neznámých vzorků?
Pozn.: Měření by mělo probíhat za laboratorní teploty (22- 28°C). Teplota vzorků by měla být stejná, proto
nedržte zkumavku se vzorkem před měřením dlouho v ruce, po každém měření zkumavku ihned vytáhněte
z přístroje a mezi jednotlivými měřeními ji ponechte inkubovat alespoň 30 sec při laboratorní teplotě.