Stanovení koncentrace DNA a proteinu pomocí mikrofluorometru
Materiál
• Quant-iT™ dsDNA BR Assay Kit, Quant-iT™ ssDNA Assay Kit, Quant-iT™ protein Assay Kit
• Standardy dsDNA, ssDNA a proteinu
• Vzorek dsDNA, ssDNA a proteinu o neznámé koncentraci
• Qubit mikrozkumavky
• Mikrofluorometr Qubit™ (Invitrogen)
Postup
1. Připravte si cca 1 ml Working solution smícháním Quant-iT™ reagent a Quant-iT™ buffer
v poměru 1:200 (1 µl reagent : 200 µl buffer) zvlášť pro ssDNA, dsDNA a protein
2. Připravte standardy smícháním 190 µl Working solution + 10 µl příslušného standardu #1 a #2 (#3
pro protein)
3. Připravte vzorek o neznámé koncentraci ve dvou mikrozkumavkách smícháním 195 µl Working
solution + 5 µl vzorku
4. Standardy i vzorky krátce promíchejte na vortexu (2-3 sec), opatrně - ve vzorku nesmí být
bublinky!!
5. Inkubace 5-10 minut při laboratorní teplotě
6. Zapněte Qubit fluorometr, vyberte příslušnou metodu (metoda v přístroji musí mít stejný název jako
kit, který používáte), nová kalibrace (standardy), poté změřte neznámý vzorek (od každé zkumavky
3 měření)
Pozn.: Měření by mělo probíhat za laboratorní teploty (22- 28°C). Teplota vzorků by měla být stejná, proto
nedržte zkumavku se vzorkem před měřením dlouho v rukách, po každém měření zkumavku ihned vytáhněte
z přístroje a mezi jednotlivými měřeními ji ponechte inkubovat alespoň 30 sec při laboratorní teplotě.
Výsledky
Stanovení koncentrace DNA a RNA v neznámých vzorcích.