Metody stanovení NO
Stručné představení vybraných
analytických metod stanovení oxidu
dusnatého
Oxid dusnatý
ON
0,14 nm
Plyn, Molekula obsahuje nepárový elektron 
radikálová povaha, vysoce reaktivní
Významná signální molekula u obratlovců
Kardiovaskulární systém Imunitní systémNervový systém
NO je syntetizován
výhradně enzymově –
NO syntázy
N O
Komplexy s
přechodnými kovy
Oxidace
ONO2
N2O3/
NO+ Nitrosační
reakce
Zásobní formy NO
Aktivace guanylátcyklázy S-nitrososloučeniny
NO2
-, NO3
-
Potenciostat
Elektrochemické stanovení NO
Pracovníelektroda
Pomocnáelektroda
Referenčníelektroda
NO
NO NO+
e-
Hydrofobnímembrána
10 s
1000 pA
Respons
e
30 nM
20 nM
200 nM
100 nM
50 nM
Elektrochemické stanovení NO
Chemiluminiscenční stanovení
NO
NO + O3 O2 + NO2*
NO2* NO2
Základní parametry
 LOD (plyn) 0.5 ppb NO
 LOD (kapalný vzorek) 1 pmol NO (RSNO/FeNO/NO2
-,NO3
-)
NO ve vydechovaném vzduchu
„on-line metoda“
 Tlakem řízený postup (restriktor zabezpečuje tlakový gradient a
konstantní rychlost výdechu)
 Průtokoměrem řízený postup
 Software umožňuje řízení experimentu podle standardů ATS
NO ve vydechovaném vzduchu
„off-line metoda“
 Sběr vzorků pro pozdější
zpracování
 Stabilita vzorků do 48 h
 Metoda v souladu s
doporučeními ATS
NO ve vydechovaném vzduchu
drobných živočichů
 Komůrka pro myši
Stanovení RSNO/NO2
-/NO3
- v
kapalných vzorcích
 Převedení těchto látek na NO
RSNO: redukce/katalytic. rozklad
NO2
-: redukce iodidem
NO3
-: redukce VCl3/HCl (95°C)
 LOD 1 pmol
 Rozsah do cca 100 uM
 Software pro kalibraci a
automatické vyhodnocení
měření
Úprava vzorku před měřením
 Deproteinizace
 Selektivní odstranění NO2
-
(RSNO)
Elektronová paramagnetická
rezonance (EPR)
Elektronová paramagnetická
rezonance (EPR)
 Lze stanovit volné radikály ve tkáních
 Použití sond/spinových pastí
N
S
S
N
S
S
Fe
O
N
N
S
S
N
S
S
Fe
Fe- thiokarbamátové komplexy
Mikrofluidika
Stručné představení
Cévní systém
Mikrofluidika
Mikrofluidní čipy