DALŠÍ
GRAMPOZITIVNÍ
BAKTERIE
P03
Rod Enterococcus
 G+ koky v drobných shlucích či krátkých
řetízcích
 Vysoká odolnost – 6,5 % NaCl, žluč, azid sodný, pH 4,8 -
11
 Jak napovídá rodové jméno – součástí normální mikroflóry
střeva.
 Jsou jedním z nejběžnějších původců močových infekcí
 Nozokomiální infekce (rány, sepse, endokarditidy,
implantáty aj.)
 Primární rezistence k cefalosporinům
 Nejčastěji E. faecalis (90%),
E. faecium a další
Rod Listeria
 G+ krátké tyčinky
 vyskytují se v prostředí a potravinách (mléko, sýry,
zelenina, maso, půda, listí…),
 Vyznačují schopností růst při nízkých teplotách
(4 °C) (pohyb) a vysokých koncentracích NaCl či
žluči
 Kataláza +
 L. monocytogenes, L. ivanovi,
L. innocua aj.
Listerióza (L. monocytogenes)
- zřídka vyvolává viditelné infekce
dospělých (gastroenteritida, horečnaté
onemocnění)
- je však nebezpečná pro těhotné a
novorozence (bakteriémie, meningitida,
pneumonie),
a pro oslabené osoby
(infekce ran, sepse,
meningitidy)
Korynebacteria
 Korynebakteria jsou G+ tyčinky kyjovitého tvaru
(koryné = kyj), některá jsou pleomorfní (různotvará),
popřípadě i nekonstantně probarvená (gramlabilní)
 Odolné k vyschnutí a NaCl, nerostou však na MH bez
krve
 Kataláza +
 Patří sem C. diphtheriae -původce záškrtu, dnes díky
očkování u nás vzácný
 Skupina tzv. nedifterických (= nezáškrtových) – jsou
normální součástí běžné flóry na kůži, spolu se
stafylokoky a kvasinkami
Korynebakteria- tvary
Rod Bacillus
 G+ mohutné tyčinky s rovnými
konci
 Tvoří jednu endosporu, pohyblivé
 Kataláza +
 Většina příslušníků rodu Bacillus jsou neškodné
mikroby, jejich spóry se vyskytují ve vnějším prostředí.
Pokud se vyskytnou v kultivaci klinického vzorku, jde
pravděpodobně o kontaminaci
 Bacillus anthracis se stal populárním při
teroristických hrozbách. Obligátní patogen, původce
veterinárního onemocnění – antraxu – byl jednou z
prvních nákaz, proti nimž byla zkoušena (Pasteurem)
vakcinace.
 Bacillus cereus je původcem enterotoxikóz a infekcí
oka. U imunokompromitovaných osob- infekce ran,
endokarditidy, sepse.
 Bacillus stearothemophillus a Bacillus subtilis se
vzhledem ke své schopnosti přežívat při velmi vysokých
teplotách používají jako indikátory účinnosti
sterilizátorů.
Léčba infekcí způsobených
enterokoky a G+ tyčinkami
 Na enterokoky ani na listerie neplatí cefalosporiny. U E.
faecalis je výhodný ampicilin, u E. faecium je primární
rezistence.
 Dále se používá ko-trimoxazol, doxycyklin, jako rezerva
vankomycin.
 V poslední době se zejména u hematoonkologických
pacientů objevují epidemiologicky závažné vankomycin
rezistentní kmeny – VRE. Zde zabírá pouze nové
antibiotikum – linezolid.
VRE 2012
Diagnostika
Enterokok Listerie Koryneform. Bacillus
G+ koky
v.krátkých
řetízcích
G+ tyčinky
řetězící se
jako
špekáčky
G+ tyčinky
skládající se
vedle sebe
(palisády)
G+ robustní
tyčinky,
sporulující
(nemusí být
viditelné)
šedavé, velké
asi jako Str.
agalactiae,
většinou bez
hemolýzy, ale i
s virid. či h.
podobné
entero-
kokům,
hemolýza je
či není
velmi drobné
kolonie
podobné
mouce
plsťovité
kolonie,
někdy i
výrazná
hemolýza
KultivaceMikroskopie
Diagnostika- enterokoky
 Biochemické testy: kataláza negativní, možné je
biochemické rozlišení, důležité štěpení arabinosy
(E. faecalis neštěpí, půda je zelená, E. faecium
štěpí, žloutne)
 Citlivost lze testovat na běžném MH agaru. Existují
i půdy na screening VRE
Diagnostika-G+ tyčinky
 Biochemické testy: kataláza u všech tří pozitivní.
Biochemicky lze rozlišovat koryneformní tyčinky
navzájem (API Coryne, Remel)
 Růst při nízkých teplotách a vysokých
koncentracích NaCl se používají v diagnostice
listerií
 Průkaz antigenu – například průkaz difterického
toxinu Elekovým testem
Úkol 1: Barvení kultur podle Grama
 Obarvěte podle Grama osm podezřelých kmenů
(pro zopakování: natřít, nechat uschnout, fixovat
plamenem, poté barvit: Gram 30 s, Lugol 30 s,
alkohol 15 s, voda, safranin 60 s, voda, osušit,
imerzní obj.)
 Rozlišíte bakterie podle tvaru a typu buněčné
stěny. Pro vzájemné rozlišení G+ koků a
vzájemné rozlišení G+ tyčinek musíte
pokračovat dál.
Úkol 2: Kultivace na krevním agaru
 Popište všechny kmeny, které se v úkolu č. 1
barvily jako grampozitivní. Popište velikost,
barvu, tvar, profil a hemolytické vlastnosti. Podle
možnosti popište i další (povrch, okraje,
konzistence, průhlednost, zápach).
 Pokuste se odhadnout, který z G+ koků by mohl
být stafylokok (bílý, máslovité kolonie)
 Pokuste se odhadnout, která z G+ tyčinek je
Listeria, Bacillus a Corynebacterium
Úkol 3: Kataláza, Slanetz Bartley a žluč-
eskulin
 3a: Proveďte u všech grampozitivních kmenů katalázový
test
 3b: Zjistěte, které kmeny rostou na Slanetz-Bartelyho
půdě s azidem sodným. To by měly být enterokoky.
 3c: Na žluč-eskulinovém agaru roste ještě jeden kmen
navíc. Ten, který zde roste, a přitom neroste na půdě s
azidem sodným, by měl být Listeria
Žluč-eskulinový agar Slanetz-Bartley
Úkoly 4: rozlišení enterokoků
Zelená - E. faecalis
Žlutá + E. faecium
 V úkolu 4a sledujte výsledek arabinózového testu
(kolonie se smísily s arabinózou a indikátorem, a
nechaly inkubovat)
V úkolu 4b odečtěte výsledek EnCoccus testu.
Má jen osm reakcí.
Určete výsledek pomocí návodů na svých stolech.
% pravděpodobnosti a index typičnosti
nevyplňujte, protože nemáte jak je zjistit.
Úkol 5: Další testy k listeriím
 5a – Růst při 4 °C – Ze všech námi
studovaných G+ tyčinek jen Listeria je schopna
růst při nízkých teplotách. To jí umožňuje šíření
v sýrárnách. Z jiných bakterií (ne G+ tyčinek),
roste při chladničkových teplotách několik
dalších druhů (Yersinia, některé druhy
pseudomonád apod.)
5b Chromogenní půda na listerie
Existují různé chromogenní půdy k diagnostice listerií. Ta,
která je na obrázku, se vyznačuje modrým zbarvením
všech listerií; patogenní druhy navíc mají kolem sebe halo
(odlišně zbarvené okolí kolonie).
ALOA
HALO
www.oxoid.com
Úkol 6a: Odečtěte podle této tabulky
Antibiotikum Zkratka Referenč.
zóna
Ampicilin (aminopenicilin) AMP 10 mm
Nitrofurantoin F 15 mm
Vankomycin VA 12 mm
Tetracyklin TE 19 mm
Q+D QD 22 mm
Gentamicin CN 8 mm
 Všimněte si, které bakterie testujeme na MH
a které na MH s krvinkami.
 Úkol 6b: Demonstrace testu citlivosti
u kmene Enterococcus faecium
 Úkol 6c: Demonstrace kmene VRE
Úkol 7: Elekův test
Jde o detekci toxinu.
Používáme papírek
se specifickým
antitoxinem, který je
položen na povrch
agaru, poté se očkují
testované kmeny.
Pozitivní výsledek =
precipitační linie.