Růstové cykly bakterií Buněčný cyklus Caulobacter crescentus 1 Růstové cykly bakterií II. Střídání přisedlé a volné (plovoucí) formy života u prokaryot Caulobacter crescentus Sphaerotilus natans Biofilm http://onlinelibrary.wiley.com/store/10.1002/smll.201202334/asset/image_m/mcontent.jpg?v=1&s=840d58 a0b15a4de1e8334d931ef17cd270dbf58f 2 • Biofilm 3 Vodní prostředí pevné povrchy http://www.lf3.cuni.cz/ustavy/mikrobiologie/teozak/biofilm/biofil15.gif …společenství buněk usazených v glykokalyx, přichycených k povrchu nebo okolním buňkám, se změněným fenotypem růstu a jinou transkripcí genů 4 • Biofilm / mikrokolonie: •volně plovoucí (planktonické) buňky usazené (na vhodném povrchu) v matrix z polysacharidů formující „hřibovité“ útvary s dutinkami, kanálky a stopkami. • •Je zodpovědný za 65% onemocnění západního světa. http://focosi.altervista.org/pseudomonasbiofilm.jpg Složky biofilmu: Bakteriální buňky a jiné organismy uvnitř hřibovitých shluků propojených kanálky a póry. •Jednodruhový •Vícedruhový • 5 •Charakterizace mikrobiální fyziologie: • - planktonní buňky nebo buňky biofilmu? • •Jaké vlastnosti musí mít bakteriální povlak, aby byl za biofilm označen? • - nově proti původní definici: •„struktury a závoje vznikající •i bez přítomnosti pevné podložky…“ • (surface-attached) a planktonní (free-floating) 6 Hall-Stoodley L, JW Costerton, and P Stoodley. 2004. "Bacterial Biofilms: From the Natural Environment to Infectious Diseases." Nature Reviews: Microbiology. 2:95-108. Lewis K. 2004. "Persistor Cells and the Riddle of Biofilm Survival." Biochemistry (Moscow). 70(2):267-274. Nový objev mikrobiologů v USA: nejen pevné povrchy, ale i v bujonu ve zkumavce po delší kultivaci, dříve než buňky klesnou ke dnu… •Síťovina z polymeru - hexagonální stěny kanálků, 150 nm • •Kanálky vznikají z plochých struktur v periodických vzdálenostech • •Na periferii tvoří buňky kompaktní závoje - tlumí střihové síly • •Funkce síťoviny: lešení, asi i přenos signálu a ukazatel směru posunu • •Popsány i struktury vlákének spojujících jednotlivá místa síťky • •Zatím nezodpovězené otázky: jakto, že ne seskupení amorfní kapky? • Jak to, že se řadí v pravidelných intervalech? • Co bakterie zastaví po dosažení 150ti nm tloušťky stěny? S. epidermidis, Ps. aeruginosa 7 Jak biofilm vzniká.. Přilnutí: adheziny (GP nebo PS) Změna fenotypu Produkce PS Lešení Mikrokolonie a kanálky Impulsy (buňky detekující hustotu populace - quorum sensing) Tloušťka – až stovky μm dle živin a počtu druhů. Koexistence aerobů a anaerobů. V různých vrstvách různý náboj Jednodruhový – př: aerob P. aeruginosa – mnohem tenčí biofilm než vícedruhový. 8 Vlastnosti a změny buněk při vzniku biofilmu •Přilnutí: • - spouští se řada genů • • - uplatňují se bičíky • • - u G- bakterií fimbrie (=pili) • - některé salmonely a E. coli • – zvl. typ fimbrií z amyloidu: curli • (význam při studiu patogeneze u Alzheimerovy choroby) • •Zkumavka: stac. kultivace: plovoucí E. coli, bez usazování na skle •Nádoba s přítokem živin: vzniká povlak s odlišnými buňkami – mutací změněna jediná AMK v regulační bílkovině genu pro curli 9 •Vznik biofilmu •– přizpůsobení přisedlému způsobu života: • •Mechanismy adheze: adhesiny, fimbrie – curli, glykokalyx •Reverzibilní – van der Waalsovy síly – slabé vazby •Irreverzibilní – chemická vazba (kovalentní, vodíková) • - přítomnost extracelulárních polymerů • •Změna fenotypu - ustává syntéza bičíků, mukózní látky • •Spouštěcí podněty: •Osmotický tlak •Snížený obsah kyslíku •Rostoucí hustota poulace - quorum sensing • např: acyl-homoserin lakton (G-), malé peptidy (G+) 10 •Po přichycení změna vlastností: • - zprvu na úrovni regulace genů • - 1/3 bílkovin se produkuje v rozdílném poměru • - více tvořeny bílkoviny • 1) pórů • 2) transportní • 3) syntetizující mimobuněčnou hmotu • •Po přichycení nutno • vytvořit matrici • - z polysacharidu • - př: P. aeruginosa • PS alginát, již 15 minut • po přisednutí http://www.lf3.cuni.cz/ustavy/mikrobiologie/teozak/biofilm/biofil20.gif Změna bílkovinného profilu populace 11 • •Reversibilní přilnutí (attachment): buňky se přechodně fixují k substrátu genová exprese (povrchem indukovaná) ústí do tvorby proteinového profilu zřetelně odlišného od planktonních buněk • •Ireverzibilní přilnutí: reorientace buněk, shlukování, ztráta pohyblivosti aktivacie regulonu quorum sensing • •Maturace I: buněčné shluky silnější, aktivován rhl quorum sensing system • •Maturace II: buněčné shluky dosahují maximální tloušťky • • •Disperze: změna struktury shluků, formování pórů a kanálků. •Přítomnost pohyblivých i nepohyblivých buněk. Pseudomonas aeruginosa fáze vzniku biofilmu 12 • Buněčné povrchy vs povrchy podkladu Buněčný náboj Adheze buňky Souvislost mezi cytologickými znaky a proměnlivými formami existence buňky – v závislosti na kontaktu, receptorech, substrátu, prostředí... http://www.uclouvain.be/cps/ucl/doc/isv/images/News_Prachi_mars_385x228.jpg Fáze vzniku biofilmu: přilnutí k povrchu 13 •Interakce s povrchy – biotickými i abiotickými • •Bakterie evolučně úspěšné – kolonizují všechny niky... • •Research topic (pubmed 120-200 publikací/rok) • •Jeden z faktorů virulence • • • Adheze bakterií http://www.nihon-u.ac.jp/arish/prof/figures/hamada.gif 14 Fáze vzniku biofilmu: přilnutí k povrchu Adheze bakterií a indukce cytologických změn •„surface sensing“; • ne všechny buňky na všechny povrchy • • • • • • • •Roli hrají: • - vhodné receptory a kompatibilita s cílovou molekulou (C. diphtheriae • epitel hrdla; S. salivarius – zub, chlopně...) • - vznik ireverzibilní vazby s povrchem/mlk • - hydrofobicita buněčného povrchu (hydrofobní MO formují biofilmy) •Interakce buňky s povrchem indukuje změnu exprese genů buněčné morfologie, motility a adheze http://www.pnas.org/content/108/49/19484/F6.large.jpg Fáze vzniku biofilmu: přilnutí k povrchu 15 •Prostřednictvím: pilli, povrchových proteinů, kapsul a slizů • •„surface sensing“ --- swarming --- reverzibilní vazby (hydrostatické, elektrostatické) --- irreverzibilní vazby; specializace •Inhibice adherence • - izolované adheziny nebo molekulry receptorů • - analogy receptorů nebo adhezinů • - enzymy nebo chem. l. specificky ničící adheziny/ receptory • - protilátky povrchově specifické •Výhody: • - substrát zdroj živin/iontů/... – přenos pilli/OMP • (Př. Shewanella – ionty kovů Fe, Mg – term.akcept. při respir) • - biofilm – laterál. výměna genů, lipidů • - vyšší rezistence (spuštění genů...) Fáze vzniku biofilmu: přilnutí k povrchu 16 •Signalizace mezi buňkami podmíněná jejich koncentrací. • •Integrace signálů z prostředí - předávány buněčnými transdukčními mechanismy. • •Koordinace genové exprese v závislosti na místní hustotě populace • • Podobně činí některé sociální druhy hmyzu, kde používají quorum sensing ke kolektivním rozhodnutím, např. kde vybudovat hnízdo. • • Fáze vzniku biofilmu: Quorum – sensing 17 Quorum - sensing •Soustava malých organických molekul, které jsou buňkou tvořeny v závislosti na koncentraci jich samotných v prostředí • •Buňka tak reaguje na hustotu populace • •Kaskáda reakcí po vazbě na receptor spouští syntézu sekundárních metabolitů a komunikaci v rámci bakt. společenstva • •Vnitrodruhová •organizace komunity 18 Quorum – sensing - regulace luminiscence u Vibrio fischeri • Luminiscenční bakterie neemitují světlo, jsou-li v planktonním stavu. Výdej světla energeticky náročný. 19 •Extracelulární molekuly – regulace transkripce operonů •Výzkum – Vibrio fischeri – model QS systémů • světélkování orgánů jen při určité hustotě buněk • akumulace N-3-oxohexanoyl-homoserinlaktonu (1981) • - tato mlk reguluje i syntézu jiných látek – ATB, elastáza, • hemolysiny, rhamnolipidy... Quorum – sensing = cell/cell signaling http://3.bp.blogspot.com/-XdfgazUiVbg/TdJwXLoGjTI/AAAAAAAABXo/rM3wHesPFHc/s1600/lux-vibrio-quorum.g if http://biopharmconsortium.com/wp-content/uploads/2012/06/Chiba_quorumsensing.jpg 20 • •Žluté diamanty v kruhu: LuxR homology aktivované HSL signálem – jeho difuze do a ven z b. •Šipky: qsc genes. •Substrát pro HSL syntázu je acetylovaný acyl-karyl protein (Acyl-ACP) a S-adenosylmethionine (SAM). •I = acyl-HSL syntetáza (LuxI homolog) •LuxR konformace Acyl-homoserin lakton (AHSL) quorum-sensing cyklus AHSL R1: H, OH, O R2: (CH2)2-14 (CH2-CH2-CH=CH-CH2-CH2) Parsek, Matthew R. and Greenberg, E. Peter (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 8789-8793 21 Signální molekuly •1 druh více než 1 QS • •Fenotypy – bioluminiscence, synt.enzymů, virulence, ATB, konjug.přenos plazmidu… •Př: P.aeruginosa, A. hydrophila… •Farmacie – snaha vyvíjet blokátory QS • •QS mezi druhy – „cross talk“ •QS a biofilm – accesory gene regulator = agr fenotyp • (ovlivňuje patogenezi) • 3D rekonstrukce dozrávání biofilmu Pseudomonas aeruginosa 22 http://1.bp.blogspot.com/-9AB7B7u_JqM/TdMrztsRrCI/AAAAAAAAJMw/k0wKULTSMKg/s1600/bob1.jpg Regulace nejen produkce luciferázy.. 23 Regulace nejen produkce luciferázy.. http://www.advancedhealing.com/wp-content/uploads/2009/12/Quorum_Sensing_Biofilm_Formation.gif 24 •!!! Ekonomika buňky: produkce extracelulárních signálů až nad určitou hustotou populace !!! • •Načasování rozmístění faktorů virulence v hostiteli je kritický bod – patogen se může hromadit bez vykazování faktorů virulence • •Více než 4% z téměř 6 000 • genů P. aeruginosa regulováno • pomocí quorum-sensing • 25 •Acyl-homoserin lakton (G- bakterie) = autoinduktor (červený) a metabol.produkt od urč.koncentrace AHSL (zelený) 26 •Quorum response in gram-postitive bacteria. • • 27 • elastický povrch v silnějším proudu posun po podložce Při dostatku živin: - povrch biofilmu se vyrovnává v 1/2 hlouby je průtok 5x pomalejší 28 Početná populace…. • • •Přenos genů • - až 1000x úspěšněji než u buněk planktonických • •Fenotyp buněk • - rytmicky se mění • - po odplavení si zachovají urč. dobu vlatnosti jako v biofilmu (R) • •Odplavení • - aktivace genu pro syntézu enzymu štěpícího matrici 29 Mikroevoluce v biofilmu http://www.sciencemag.org/content/336/6080/422/F1.large.jpg 30 Studium biofilmu – tematické okruhy 31 • Controlled Cultivation, Molecular Biology, and Advanced Imaging of Microbial Biofilms Noninvasive Biofilm Characterization Using Acoustic Microscopy Experimental Metabolism Studies of Oral Biofilm Communities Dynamics and Spatial Expression and regulation of Signal Proteins Biofilm antimicrobial sensitivity system Biofilm-associated infectious diseases; contamination in industry Biofouling - Bioadhesion and Biofilm Research Imaging of biofilms Energy conversion in biofilms Quantifying biofilm structure Model of stratified biofilms for data interpretation, analysis, and biofilm activity prediction Studium biofilmu •Jsme na čipu/v mikrotitračních destičkách schopni napodobit podmínky přirozeného prostředí biofilmu pro studovanou populaci buněk? (průtok; živiny; chem. Složení; množství kyslíku • •Vykazují buňky vůči sobě stejné interakce jako v přirozeném prostředí? (poté indukce genů...ovlivnění složení/chování populace buněk...) • •Druhové zastoupení? V prostředí vyšší selekce – více vnějších faktorů... • •Sbírkové kmeny? Z prostředí? 32 http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Media/Images/LabExercises/Applications/Coagg regationAssay.jpg •Tvorba a spojování koagregátů uvnitř 1 rodu a mezi různými rody •Dělení v mikrokolonii koagregátu • •Pomnožené kultury, promyté v a kultivované v koagregačním pufru: 1 mM Tris [pH 8,0] 0,1 mM CaCl2 0,1 mM MgCl2 150 mM NaCl 0,02% NaN3 33 •Studium struktury – větš. u G- •polysacharidová glykokalyx •mikroskopie: • - světelný mikroskop: obtížné • - elektronový: nepracuje se živými buňkami • - konfokální: - plochy ve zvolené hloubce • - z řezů skládána struktura • časosběrná metoda: záznam • - řádkovací elektronoptická technika… • •Studium složení • •Detekce - studium přítomnosti genů/látek • souvisejících s tvorbou biofilmu • - mikrotitrační destičky, mikročipy, sondy, • PCR, hmotnostní spektrometrie.... • Biofilm = společenství buněk v čase!! Studium biofilmu.. http://pubs.rsc.org/services/images/RSCpubs.ePlatform.Service.FreeContent.ImageService.svc/ImageSer vice/Articleimage/2008/LC/b804790a/b804790a-f2.gif 34 http://www.sysbio.org/images/biofilm4.jpg Shewanella biofilm – konf.mikr. http://www.intechopen.com/source/html/19069/media/image3.jpeg Bioluminiscence ATP- assay Studium biofilmu.. 35 Role of the PI-2A pilus in biofilm formation.S. agalactiae strains were grown in 96 wells polystyrene plates in LB supplemented with 1% glucose at 37°C for 24 h. Adherent bacteria were stained with crystal violet (CV) and quantification was performed by measuring the absorbance at 595 nm. Results are representative of three experiments. Error bars show standard deviations. Studium biofilmu.. Role of the PI-2A pilus in biofilm formation. S. agalactiae strains were grown in 96 wells polystyrene plates in LB supplemented with 1% glucose at 37°C for 24 h. Adherent bacteria were stained with crystal violet (CV) and quantification was performed by measuring the absorbance at 595 nm. Results are representative of three experiments. Error bars show standard deviations. Konto-Ghiorghi Y, Mairey E, Mallet A, Duménil G, Caliot E, Trieu-Cuot P, Dramsi S - PLoS Pathog. (2009): Dual Role for Pilus in Adherence to Epithelial Cells and Biofilm Formation in Streptococcus agalactiae 36 • •Pseudomonas aeruginosa •formování biofilmu - pět kroků •exprese více jak 800 proteinů •(tedy víc jak polovina proteomu) •6 i vícenásobně zvýšená • • Značná část experimentů prováděna s kulturami: .. výzkum patogeneze 37 Horniny a bakterie - koevoluce •Složení minerálů ovlivňuje počet a diverzitu mikrobů •Síru oxidující bakterie silně okyselují prostředí a tvoří póry •Závisí tvorba biofilmu hornin na jejich složení? Geobacter, a rock-dwelling bacteria coating iron oxide minerals. Credit: Wikipedia Geobacter, a rock-dwelling bacteria coating iron oxide minerals. 38 • Example of a benchtop bioreactor. Bioreactors are commonly used in microbial biotechnology for cell culturing and fermentation. Credit: Wikimedia Commons •Bioreaktory s horninami (bohaté na uhličitan vápenatý a křemík) •Inokulace síru metabolizujícícmi bakteriemi z parku Wyoming •Tři týdny inkubace •DNA extrakce + pyrosekvenace prourčení diverzity MO •Na uhličitanech bakterie rostly v tenkých biofilmech a formovaly vlákna; alfaproteobakterie; síru oxidující - 10-45% •Křemičitany – řidší růst + formování shluků či individuální buňky; firmicutes, aktinobakterie •Co ovlivňuje hustotu osídlení? Dostupnost prvků, jako např. fosfor, v uhličitanech? Jejich pufrující schopnosti? Hliník obsažený v křemičitanech růst asi brzdí? Nebo kumulace kyseliny na nich, protože tak dobře nepufrují? •I vazby bakterií na dva odlišné substráty se liší •Ty co odolávají toxinům – mají jiné unikátní vlastnosti Jones, A., & Bennett, P. (2014). Mineral Microniches Control the Diversity of Subsurface Microbial PopulationsGeomicrobiology Journal, 31 (3), 246-261 DOI:10.1080/01490451.2013.809174 39 •Zvláštnosti biofilmu •Přenos genů mezi buňkami až 1 000x větší • •Vyšší rezistence k ATB a dezinfekci (H202, chlor) • - omezená difúze • - sorpce ATB • - klidový stav, hladovění • - změna genotypu: •geny mar •– multiple ATB resistance •- efflux systém •- enzymatická degradace •- modifikace cílových mlk - •Speciální sigma faktory • •Signální mechanismy 40 • •Zubní povlak • – A. van Leewenhoek • - periodontitida •Střevní sliznice •Infekce • – sliznice nebo uvnitř tkáně; • - endokarditida • - trvalý biofilm na chlopních • (hl. strepto- a stafylokoky; • nebezpečí z krvácivých dásní..) •- rány; bércové vředy; spáleniny • • Biofilm v lidském těle výhoda biofilmu – perzistence a R k ATB pH při rozkladu zásobních cukrů poškozuje sklovinu zubu - silně redukující prostředí v kapsách pod dásní – proliferace anaerobů 41 •Chronické infekce •– dýchací cesty • Cystická fibróza – genet. onemocnění (porucha iont. rovnováhy) • Vývoj: běžné infekce (stafylokoky, hemofily, pneumokoky) • později na poškozené tkáni P. aeruginosa; v alginátu odolné. • CHOPN •- ušní infekce •- močové cesty •- chronický zánět prostaty • • - Imunokomprimovaní – kolonizace alveol, až kalcifikace.. Biofilm nespouští imunitní odpověď. 42 Biofilm skloviny 700 kmenů z 18ti rodů Oral multispecies biofilm development and the key role of cell–cell distance Mezibuněčný kontakt – role adhezinů (lektiny) a receptorů (sacharidy) Kontak s povrchem zubu – pelikula proteinů, lektiny... (Rickert et al. 2003) 43 •1970, Gibbons and Nygaard • - ve smíšené kultuře Actinomyces naeslundii a Streptococcus sanquinis z dentálního povlaku – „koagregace“ • •Proces vzniku biofilmu: • 1) přilnutí vrstvičky proteinů • 2) první kolonizátoři • 3) aktinomycety, Fusobacterium • 4) pozdní kolonizátoři na fusobakteria • •Proces kolonizace – souslednost • - ústní hygiena • - a dostupnosti vhodných „partnerů“ • pro agregaci mikrokolonií • a jejich následné párování. • •Často pouhá přítomnost kmene nestačí, je potřeba •přítomnosti vhodných partnerů koagregace v dostatečném množství. • • • • • • • http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Media/Images/LabExercises/Applications/Denta lBiofilms.jpg Rickert et al. 2003 44 Interactions between coaggregating pairs of organisms. http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Media/Images/LabExercises/Applications/Coagg regatingPairs.jpg Mezibuněčné interakce biofilmu zubní skloviny • 1 buňka - adheziny lektinového typu • 2 buňka - oligosacharidové skupiny • Koagregace přerušena: - denaturací lektinu - navázání cukru (laktózy) blokující lektin kompetitivní inhibicí 45 •Morfologické struktury orálního biofilmu • •“corncobs” – koky koagregující s vláknitými bakteriemi • •“rosette” - 1 buňka koagregující s koky • • •“test tube brush formations” http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Media/Images/LabExercises/Applications/Cornc obFormations.jpg corncobs 46 •Tvorba a spojování koagregátů •Dělení v mikrokolonii koagregátu Růst dentálního biofilmu http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Media/Images/LabExercises/Applications/Biofi lmMassIncrease.jpg 47 •Cévky – arteriální, žilní •Močové katetry •Dýchací a dializační přístroje •Umělé chlopně •Kontaktní čočky •Děložní tělísko • • • • •Nemusí být kontakt s vnějškem! - kovové náhrady kloubů • • Biofilm a medicína Stafylokoky – fibronektin-binding protein.. pseudomonády, E. coli, streptokoky, aktinomycety… Bakterie jsou unášeny proudem krve a mohou začít infekční proces na odlehlém místě…. Vytrvalá syntéza a uvolňování toxinů… 48 •Lékařská mikrobiologie: • Pg bakterie biofilmu nelze testovat na rezistenci k antibiotikům – vykultivované bakterie jsou již planktonické = s jinými vlastnostmi! Bakterie biofilmu až 1000x rezistentnější k ATB než planktonické buňky. Experiment: Byl vytvořen umělý biofilm - Některá ATB vyvázána polysacharidem -rezistence je jednou z fenotypových změn, vzniká po aktivaci regulačních genů určité části buněk U P. aeruginosa nalezen cyklický glukan (polymer glukózy) vyvazující ATB i in vitro, vně i uvnitř buňky. Možné vysvětlení: snaha pseudomonád bránit se ATB streptomycet v prostředí tvorbou biofilmu, glukanů... Rezistence souvisí s množstvím změn při přechodu do společenství biofilmu. 49 •Terapie biofilmů • Studium mutací genů gsc, QS = studium narušení formování biofilmu – poté přístupnější ATB a dezinfekci Návrhy: aplikace ATB v intervalech; současné působení ultrazvuku a ATB, kombinace ATB a el. pole.. 50 51 Přisedlé bakterie • 52 • 53 •Buněčné dělení • asymetrické •Životní cyklus závisí na jednotlivých krocích buněčné diferenciace a asymetrického dělení • 3 700 genů 54 Plovoucí bičíkatá buňka se nereplikuje odhození a nahrazení bičíku a pilusů polární stélkou, která přichytí buňku k podkladu Nezralá stélkatá buňka se prodlužuje Uzlové body!! přisednutí na místo s vhodným substrátem a diferenciace Poté iniciace replikace DNA. Reproduktivní stélkatá buňka replikuje DNA, vznik dceřinné buňky, syntéza nového bičíku na pólu proti stélce. 55 • 56 • •Chemotaxe •Caulobacter – volné plovoucí buňky – exprese MCP-like receptorů – silná chemotaxe. Pohyb za signály, dokud nenarazí na povrch bohatý na substrát – osídlení a iniciace buněčného dělení. 57 •Esenciální transdukční proteiny mění v průběhu cyklu buněk Caulobacter svou vnitrobuněčnou lokaci • Asymetrické umístění regulátorů cyklu – = regulační systém přenosu sinálů • Strukturální analogy aktinu (MreB) - předurčení tvaru buněk C. crescentus, Escherichia coli, Bacillus subtilis - • Protein buněčného dělení: FtsZ, je protipólem tubulinu (bakterie tedy vlastní struktury vláknitého cytoskeletu) • Crescentin – podobný intermediáním filamentům – helixy a zakřivení Caulobacter – asymetrické samouspořádávání molekuly – tvar b. 58 • 59 • 60 • 61 Sphaerotilus natans G- tyčky, medium 12 •Tekoucí vody •Papírenské vody •Kaly •Aktivované kaly • – problém sedimentace • Degradace pochev – Bacillus - enzym 62 • 63 Sphaerotilus natans 64 •Micromonosporaceae, Actinoplanes sp. 65 •Pilimelia columellifera •(by G. Vobis) Příbuzný rod s Actinoplanes Sporangia s typickými řetízky spor 66 • sporangia 67 • 68 •Zdroje: •Schindler J. (2008): Ze života bakterií, ACADEMIA, Praha •www.yale.edu/jacobswagner/research.htm • •http://www.sciencedaily.com/releases/2006/04/060411222211.htm • •biology.kenyon.edu/.../Chap11/Chapter_11A.html • •http://www.pnas.org/cgi/content/full/97/16/8789 • • • 69 •http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Contents/02_Lab_Exercises/03_Applications/0 1_Instructor_Version/06_Bacteria_in_Dental_Biofilms.html •http://www.sanedentist.com/ • 70 Návody pro cvičení •Biofilm: •http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Contents/02_Lab_Exercises/03_Applications/0 1_Instructor_Version/06_Bacteria_in_Dental_Biofilms.html • •http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Contents/02_Lab_Exercises/02_Protocols_and_ Methods/01_Instructor_Version/01_Buried_Slide_Technique.html 71 •http://www.hypertextbookshop.com/biofilmbook/v005/r001/Contents/02_Lab_Exercises/00_Lab_Overview/0 1_Lab_Exercises_Overview.html 72 •Děkuji za pozornost 73