Protokol č. 1
Mikroskopické techniky
Tereza Kubasová

Typy preparátů
oNativní preparát
o- pozorování skutečného tvaru
o
oBarvený preparát
o- barvení buněčné stěny nebo struktur
o- Gramovo barvení, negativní barvení, jednoduché barvení, acidorezistentní atd.

Mikroskopování
oJasné pole (barvené preparáty)
oFázový kontrast (nativní preparát)
oNomarského kontrast (nativní preparát)

Jasné pole
opozorujeme barvené preparáty
omaximální zvětšení 1500x
opozorování pod imerzí
o

Jasné pole – jednoduché barvení
Lactobacillus brevis CCM 3805T
- krátké tyčky
Bacillus cereus CCM 2010
- tyčky v řetízcích
Zvětšení 1000x
Pozn. Lactobacillus kultivován ve vysokém sloupci kvůli větvení

Jasné pole – Gramovo barvení
b
Bacillus cereus CCM 2010
- G+ tyčky
saccharomyces
Saccharomyces cerevisiae
b
Bacillus subtilis CCM 2216
- G+ tyčky
Zvětšení 1000x

Jasné pole – negativní barvení
Lactobacillus ganesi CCM 7009
- štíhlé tyčky
Bacillus mycoides CCM 145
– tvar tyček
Lactobacillus jensenii CCM 7560
- tvar tyček
Zvětšení 1000x

Jasné pole – acidorezistentní bar.
Corynebacterium glutamicum CCM 2428
Mycobacterium phlei CCM 5639
Zvětšení 1000x

Jasné pole – barvení spor
Bacillus megaterium CCM 2007
Paenibacillus alvei CCM 2051T
Zvětšení 1000x
spora

Fázový kontrast
opozorování živých buněk v nativním preparátu
opozorujeme objekt, jehož části mají různý index lomu, čím větší index lomu, tím světleji se část
jeví

Fázový kontrast
saccharomyces2
Saccharomyces cerevisie
bacillus cirkulans
Bacillus circulans CCM 2048
spora
Zvětšení 1000x

Fázový kontrast
Sporosarcina ureae CCM 860
- koky, tetrády
Bacillus thuringiensis CCM 19
- tyčky, řetízky
Zvětšení 1000x

Nomarského kontrast
oPozorování buněk v nebarveném nativním preparátu
oPozorujeme plastický povrch buňky
oVyužití polarizovaného světla, skládá 2 paprsky (procházející objektem a mimo)
o
§
o

Nomarského kontrast
b
Sporosarcina ureae CCM 860
- koky v tetrádách
Bacillus thuringiensis CCM 19
- tyčky, řetízky
Zvětšení 1000x
Micrococcus luteus CCM 169
- koky po 2,4

Srovnání mikroskopických technik
b
Nomarského kontrast
Bacillus thuringiensis CCM 19
Bacillus cereus CCM 2010
Jasné pole
Bacillus thuringiensis CCM 19
Fázový kontrast

omorfologie kolonií je geneticky determinována, je závislá na složení media a době kultivace
ohodnotíme velikost, tvar, profil, okraje, povrch, transparentnost, barvu
odalšími popisovanými znaky jsou vůně, zápach, tvorba mycelia, změny media, konzistence
Makrofotografie kultur

DSCN1364
Makrofotografie kultur
Bacillus thuringiensis CCM 19
- okrouhlý tvar, zubaté okraje, drsný povrch, neprůhledné, bílé kolonie
DSCN1393
Bacillus cereus CCM 2010
- pravidelný,okrouhlý tvar, zubaté okraje, drsný povrch, neprůhledné, bíle kolonie

DSCN1329
Bacillus subtilis CCM 2216
- nepravidelný tvar, prstovité okraje, ploché, neprůsvitné, bíle kolonie
DSCN1400
Bacillus mycoides CCM 145
- rhizoidní kolonie, drsný povrch, neprůhledné, bílé
Makrofotografie kultur

Makrofotografie kultur
DSCN1396
Nocardia carnea CCM 2756
- okrouhlý tvar, zubaté okraje, matné, neprůhledné narůžovělé kolonie

DSCN1401
Makrofotografie kultur
Sporosarcina ureae CCM 860
- pravidelný, oválný tvar, hladké, lesklé, vypouklý, hladké okraje, neprůhledné kolonie

Makrofotografie kultur
DSCN1334
Streptococcus mutans CCM 7409
- pravidelný, kruhový tvar, vypouklý, hladké okraje, lesklý povrch, neprůhledné, bílé kolonie