Cytologie a morfologie bakterií
Bi7330
Veronika Hradilová
Makroskopické pozorování morfologie kolonií
Mikroskopické techniky- jasné pole, fázový kontrast
Gramovo barvení, negativní barvení
4/10/12

Makroskopické pozorování morfologie kolonií
•Porovnání G- a G+ kultury
DSCN2752.JPG
Serratia marcescens
DSCN2766.JPG
Micrococcus luteus
Zvětšení 10x
G-
G+

•Porovnání S a R formy (hladké a drsné okraje)
•
DSCN2834.JPG
Bacillus sphaericus
DSCN2791.JPG
Bacillus subtilis
Zvětšení 10x

•Porovnání eukaryota x prokaryota
DSCN2767.JPG DSCN2829.JPG
Arthrobacter crystallopoietes
Saccharomyces cerevisiae
Zvětšení 10x

Pozorování buněk Archaea
•  Haloarcula hispanica CCM 3601T                                   Haloferax mediterranei CCM
3361T
•
•
DSCN2812.JPG DSCN2805.JPG
•Barva lososová
•Mukózní slizovité kolonie
•Profil lehce vypouklý
•Okraje hladké
•Kolonie lesklé a průsvitné
•Barva mléčně růžová
•Profil lehce vypouklý
•Okraje hladké
•Kolonie lesklé a trochu průsvitné
•
Zvětšení 10x

Gramovo barvení
arthrobacter_kk_ii.jpg
Arthrobacter sp.
mycobacterium_phlei_micrococcus_ii_ij.jpg
Mycobacterium phlei + Micrococcus
Porovnání G- a G+ kultury
Zvětšení 1000x
G+ vymytý
G+ mikrokok a nebarvitelné
mykobakterium

b_thuringiensis3_sv.jpg sporosarcina_ureae2_sv.jpg
shluk koků x tetrakok x  řetízek z tyček
Streptococcus mutans
streptococcus_mutans_krev_pr.jpg
Sarcina
Bacillus thuringiensis
Zvětšení 1000x

Negativní barvení
b_cereus_kk_iv.jpg b_cereus_hp.jpg
Porovnání Gramova barvení a negativního barvení u jednoho druhu
Bacillus cereus
Zvětšení 1000x

Porovnání velikosti různých druhů rodu Bacillus
b_megaterium_ah_iii.jpg
B. megaterium
B.mycoides
b_thuringiensis3_sv.jpg
B. thuringiensis
bacillu_mycoides_ad2.jpg b_sphaericus2_lf.jpg
B. sphaericus

b_subtilis_spora_oval_subterminal.jpg b_megaterium_sporaii.jpg
B. megaterium
B. subtilis
•
Oválné spory neztlušťující buňku
Uloženy subterminálně až terminálně
Srovnání spor u
rodu Bacillus

b_sphaericus_spory.jpg
B. sphaericus
b_mycoides_iii.jpg
B. mycoides
Srovnání spor u
rodu Bacillus
Sférické spory ztlušťující buňku
uloženy subterminálně až terminálně

MIKROSKOPICKÉ TECHNIKY:
Pozorování v jasném poli
Gramovo barvení
•POSTUP
•Sterilní kličkou nabereme trochu bakteriální kolonie a rozetřeme v kapce sterilní vody
•zaschnutý nátěr buněk na sklíčku fixujeme plamenem
•po vychladnutí nátěr pokryjeme roztokem krystalové violeti na 15-20 sec
•opláchneme slabým proudem vody
•Na 30 sec ponoříme do Lugolova roztoku
•Opláchneme vodou, acetonem (nebo ethanolem), znovu vodou
•60 sec barvíme safraninem
•
•
ser_marcescens_ii_ph.jpg
Serratia marcescens (G+)
Zvětšení 1000x

MIKROSKOPICKÉ TECHNIKY:
Pozorování v jasném poli
Negativní barvení
•POSTUP
•sterilně přeneseme 2-3 kličky bakteriální suspenze z tekutého media na podložní sklo
•přidáme kapku nigrosinu, rozmícháme kličkou a rozetřeme jemným tahem druhého sklíčka (přiloženého
pod úhlem 45˚ po celé ploše podložního skla), druhé sklíčko ožíhneme
•nefixujeme, pozorujeme imerzním objektivem
•
l_curvatus_lf.jpg
Lactobacillus curvatus
Zvětšení 1000x

MIKROSKOPICKÉ TECHNIKY:
Fázový kontrast
•Výhodou fázového kontrastu je možnost pozorování tvaru živých objektů v nativním stavu bez
barvení.  Kontrastní obraz vidíme díky tomu, že různé části preparátu vykazují různý index lomu –
dochází k ohybu paprsků: při průchodu světelné vlny objekty s různě vysokým indexem lomu se tato
vlna v závislosti na tomto indexu lomu zpozdí, nedochází ku změně její intenzity, ale k posunu její
fáze, a to v závislosti na rozdílu indexu lomu dané struktury a okolí, na délce optické dráhy  a na
vlnové délce světla.
b_thuringiensis_sp2.jpg
Bacillus thuringiensis
Zvětšení 1000x