Protokol č. 2
Vnější a vnitřní struktury
Tereza Kubasová

oStruktury vnější (pouzdro) a vnitřní (barvení spor, volutinu, tuků, škrobu)
o
oStrukturální (diferenciační) barvení se používá k identifikaci bakterií (struktury jako
diagnostické znaky) a ke studiu struktur samotných.
Vnější a vnitřní struktury

Barvení spor
opro hodnocení morfologie buňky tvořící spory a morfologii spory samotné musíme mít kulturu
určitého stáří
opro podporu sporulace medium s přídavkem Mn.H2O
ohodnotíme tvar spory, umístění a zda vyklenuje buňku
ouložení v buňce: terminální, subterminální, centrální
o
oPozorovat neobarvené endospory můžeme fázovým (zářící spory) a Nomarského kontrastem (plastický
povrch buňky); jednoduchým barvením nevidíme spory samotné (obarvíme pouze buněčnou stěnu), jen
vyklenutí buňky (způsobené přítomností spor).
oPřímo obarvit endosporu ve stadiu vzniku kortexu je možné pouze za horka (prospora je však pro
barvivo ještě propustná!).
o

Barvení spor
Paenibacillus alvei CCM 2051T
- oválná terminální spora ztlušťující buňku
Bacillus cereus CCM 2010
- endospory oválné, centrální, neztlušťují mateřskou buňku
Bacillus sphaericus CCM 1615
- endospory kulaté, terminální, ztlušťuje mateřskou buňku
Zvětšení 1000x

Pozorování endospor fázovým kontrastem v nativním preparátu
Bacillus cereus CCM 2010
- endospory oválné, centrálně uložená neztlušťují mateřskou buňku
Paenibacillus alvei CCM 2051T
- oválná terminální spora ztlušťující buňku
Zvětšení 1000x

Pouzdra
Klebsiella pneumoniae CCM 4985
- modré buňky obklopené světlým pouzdrem
Buňka (modrá)
Pouzdro (světlé)
Zvětšení 1000x

Pouzdra
Azotobacter vinelandii CCM 289
buňka
pouzdro
Zvětšení 1000x

Inkluze
oVolutin - polyfosfátová granula (nikdy není zdrojem energie, jen fosforu, počet: 1 – mnoho, podle
metabolismu. Vysoký počet je v době před přechodem do klidového stadia (známka sporulace), společně
s glykogenem se objevuje ve starších buňkách.
o
oTuk  (v buňce se vyskytuje buďto rozptýlený ve vakuolách nebo zabudovaný v membránách. Shromažďuje
se v přítomnosti kyslíku. V buňce běžně 2-3%. Tyto intracelulární inkluze se vyskytují zejména u
kvasinek a mikromycet.)
o
oGlykogen (rozpustný polymer glukózy s α-1,4-vazbami a α-1,6 větvením na každém 8-10 monomeru, může
tvořit až 50% sušiny. Ve světelném mikroskopu není viditelný, může a nemusí mít membránu, slouží
jako pohotová rezerva)

Volutin
Saccharomyces cerevisie
Volutin
Zvětšení 1000x

Tuk
Bacillus cereus CCM 2010
Saccharomyces cerevisie
Tuk v membránách
Tukové kapénky
Zvětšení 1000x

Glykogen
Saccharomyces cerevisie
Bacillus cereus CCM 2010
Glykogen (hnědá zrnka)
Zvětšení 1000x