Nové trendy ve výzkumu mikroRNA Ondřej Slabý Masaryk Memorial Cancer Institute CEITEC, Masaryk University Molecular Oncology II – Solid Cancer Laboratory kódující geny představují méně než 2% celkové sekvence genomu vs. minimálně 90% lidského genomu je aktivně transkribováno čím více je organizmus komplexní, tím více obsahuje nekódujících RNA Svět  nekódujících  RNA   Recent evidence suggests that the non-coding RNAs (ncRNAs) may play major biological roles in cellular development, physiology and pathologies. NcRNAs could be grouped into two major classes based on the transcript size: small ncRNAs and long ncRNAs. Sana et al, J Transl Med, 2012 Nové třídy nekódujících RNA HISTORIE   1993  Ambros,  Ruvkun  –  objev  miRNA  lin-­‐4   1998  Fire,  Mello  –  popis  RNA  interference   1999  Tuschl,  Zamore,    Bartel,  Sharp     -­‐RNAi  21-­‐23  fragmenty       2000-­‐2001  Hannon     -­‐Ago2,  Dicer   2002  Zamore   RNAi  a  miRNA  sdílejí  svoji  efektorovou  dráhu   2002  Croce,  Calin  miR-­‐15,miR-­‐16  u  CLL     2004  Croce     50%  miRNA  genů  na  fragilních  častech  chromozomů   2006  Croce   Deregulace  miRNA  v  nádorové  tkáni   …   2007  První  originální  práce  na  téma     miRNA  v  onkologii  v  ČR  J     Cell,  1993   Nature,  1998   PNAS,  2004   Současnost   Victor  Ambros   2012,  CSHL   ©  O.  Slabý   NEW!   Definice  mikroRNA   MikroRNA  je  definována  jako  krátká,  21–23  nukleo_dů  dlouhá   jednořetězcová  RNA,  která  vzniká  z  dlouhého  primárního   transkriptu  (pri-­‐miRNA)  a  vlásenkové  prekurzorové  struktury   (pre-­‐miRNA)  účinkem  ribonukleáz  v  jádře  a  cytoplazmě  a  jejíž   hlavní  funkcí  je  post-­‐transkripční  regulace  genové  exprese.     Kritéria:   1)  krátká  RNA  musí  být  jednoznačně  detekovatelná  pomocí  Northern  blotu,  RT-­‐PCR  nebo  jiné  standardní   metody  umožňující  detekci  RNA,     2)  krátká  RNA  se  musí  vyskytovat  v  kmenové  čás_  vlásenkové,  asi  70  nukleo_dů  dlouhé  prekurzorové   struktury,     3)  sekvence  krátké  RNA  a  jejího  prekurzoru  musí  být  fylogene_cky  konzervovaná  (s  výjimkou  druhově   specifických  miRNA),     4)  inhibice  klíčových  ribonukleáz  v  biogenezi  miRNA  musí  vést  k  poklesu  hladin  krátké  RNA  a  k  akumulaci   její  prekurzorové  struktury.   Úvod do molekulární medicíny 4/12 Strana 29 © Ondřej Slabý, 2009 Základní  fakta  o  mikroRNA     •  miRNA  were  firstly  discribed  by  Ambros  et  al.  (1993)  in  C.  elegans  (lin-­‐4)   •  Approx.  3%  predicted  human  genes  are  miRNA  genes   •  1390  annotated  human  microRNAs*(1000  -­‐2000  predicted)   •  miRNAs  have  poten_al  to  regulate  up  to  one  half  of  genes  in  human  genome   •  Phylogene_cally  well  conserved   •  Several  miRNAs  are  encoded  by  more  than  one  gene   •  miRNA  genes  frequently  form  clusters  and  families  (eg.  cluster  miR-­‐17)   •  miRNA  genes  are  mainly  localized  in  intergenic  regions  and  in  introns   *Sanger miRBase release 17.0, 2011 Struktura  a  distribuce  genů  pro  mikroRNA  v  lidském  genomu     •  Geny  pro  miRNA  jsou  rozmístěny  na   všech  lidských  chromozomech                 s  výjimkou  chromozomu  Y.   •  Přibližně  50  %  miRNA  se  nachází  v   podobě  klastrů  (u  člověka  55  klastrů),   které  jsou  přepisovány  jako   polycistronní  primární  transkripty.     Dle  vztahu  ke  známým  a  definovaným   transkripčním  jednotkám  dělíme  na     •  Mezigenové  miRNA  (přibližně  50  %)   •  Intronové  miRNA  (přibližně  40  %)   •  miRtrony   •  Exonové  miRNA   Biogeneze  a  funkce  mikroRNA   1.  Transkripce miRNA genu 2.  pri-miRNA jsou zpracovány pomocí RNáz Drosha a Pasha 3.  pre-miRNA exportovány pomocí Exportinu 5 do cytoplazmy 4.  Zpracovaní pomocí RNázy Dicer 5.  Ak_vní  vlákno  je  inkorporováno  do   komplexu  RISC   6.  Represe  translace  nebo  degradace  mRNA  v   závislos_  na  míře  komplementarity   Biogeneze  a  funkce  mikroRNA   microRNA: licensed to kill messenger Kanonický  model  biogeneze  a  funkce  mikroRNA     DESTABILIZACE  mRNA!!!   Pokles  hladiny  proteinových  produktů     cílových  genů  je  ve  více  než  80%     způsoben  poklesem  hladin  mRNA     v  důsledku  jejích  destabilizace  a  nikoliv     translační  represí.  (využiu  RPF)     Guo,  Bartel,  Nature,  2010   DESTABILIZACE   REPRESE   REPRESE   deadenylace   NEW!   Biologický  poločas  a  rozpad  mikroRNA   Kai  S,  Nature  Struct.  Mol.  Biol.  2010   MiRNA  obecně  představují  vysoce  stabilní  molekuly,  poločas  miRNA     v  buněčných  liniích  nebo  orgánech  dosahuje  mnoho  hodin  nebo  dokonce  i  dnů!     MiRNA  mohou  být  regulované  například  blokováním  jejich  vazebných  míst  na   mRNA  pomocí  RNA-­‐vazebných  proteinů.  Volné  miRNA  jsou  méně  stabilní     Koncept  kompetujících  endogenních  RNA  -­‐  ceRNAs   Opačné  vnímání  regulačního  mechanizmu  miRNA  →  mRNA,  kdy  tzv.  „compe_ng   endogenous  RNA“  (ceRNA)  regulují  hladinu  daného  transkriptu  tak,  že  soutěží  o  vazbu   miRNA,  která  má  schopnost  daný  transkript  post-­‐transkripčně     regulovat.  Všechny  transkripty,  které  mají  vazebná     místa  pro  jednu  miRNA,  a  tak  možnost  soutěžit     její  vazbu  a  vzájemně  ko-­‐regulovat  svou  expresi,   potom  vytvářejí  komplexní  síť  (ceRNA  network).     Salmena,  Pandolfi,  Cell,  2011   Alemeida,  Calin,  Expert  Opin.  Biol.  Ther.,  2012   NEW!   IzomiRs   Neilsen,  Trends  in  Gene_cs,  2012   •  Poprvé  popsány  v  roce  2008  na  základě  výsledků  sekvenačních  studií  (Morin  et  al.,  2008,  Genome   Res)   •  Jedna  oblast  kódující  miRNA  může  vést  ke  vzniku  mnoha  rozdílných  izomiRs.   •  Zastoupení  jednotlivých  izomiRs  je  tkáňově  specifické  a  může  se  měnit  v  rámci  odpovědi   na  různé  biologické  signály.     •  Vznik  5’  a  3’  izomiRs  je  podmíněn  štěpením  Droshou  a  Dicerem  nebo  účinkem  transferáz.   •  Polymorfní  izomiRs  mohou  vznikat  v  důsledku  SNP  (vzácné)  nebo  editací  mikroRNA  (A-­‐I).     Funkční  dopady:  specificita  pro  cílové  mRNA,  Ago  loading,  biologický  poločas   NEW!   MikroRNA  jako  onkogeny  nebo  nádorové  supresory   Lujambio,  Nature  2012   Kong  et  al,  Lancet  Oncology  2012   Kasinsky,  Slack,  Nature  Reviews  Cancer,  2012   MikroRNA  jako  onkogeny  nebo  TS  v  závislos`  na  kontextu   MiR-205 má vlastnosti nádorového supresoru u adenokarcinomu a onkogenu u spinocelulární karcinomu jícnu   EM ET 0 5 10 15 20 Relativníexprese2-ΔctmiR-205 p=0,0017 EAC EAC ESSC 0 20 40 60 Relativníexprese2-ΔctmiR-205 p<0,0001 *** mock 24 48 72 96 0.001 0.010 0.100 1 hodinynormalizovanaexpresemiR-205 KYSE-150 (ESSC linie) mock 24 48 72 96 0.00001 0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10 100 hodiny normalizovanaexpresemiR-205 SKGT-4 (EAC linie) 0 24 48 72 96 120 100000 200000 300000 hodiny pocetbunekSKGT-4 mock pre-miR-205 p=0,04 0 24 48 72 96 120 100000 200000 300000 hodiny pocetbunekKYSE-150 mock anti-miR-205 p=0,02 A B C D 0 20 40 60 0 50 100 EACpatients měsíce %OS lowexpressionofmR-205 highexpressionofmiR-205 p=0,007 0 20 40 60 0 50 100 ESSCpatients měsíce %OS lowexpressionofmiR-205 highexpressionofmiR-205 Hezova  et  al,  2014   mock anti-miR-205 0 20 40 60 80 nezarostlýprostor% p< 0,0001 mock pre-miR-205 0 20 40 60 80 nezarostlýprostor% A B C D E F Kyse-150 mock 0h Kyse-150 mock 24h Kyse-150 anti-miR-205 0h Kyse-150 anti-miR-205 24h KYSE-150 (ESSC linie) SKGT-4 (EAC linie) Renata  Héžová   MikroRNA  v  patogenezi  nádorových  onemocnění   MikroRNA  jsou  zapojeny  do  regulace  všech  šes`  klasických  a  čtyř  nových  znaků  maligního   nádoru  dle  Weinberga  a  Hanahana.  (Hallmarks  of  Cancer:  The  Next  Genera`on,  Cell,  2011)       Slaby  et  al.,  Galen,  2012   MikroRNA  v  patogenezi  nádorových  onemocnění   NEW!   Slaby  et  al.,  Galen,  2012   MikroRNA  jsou  zapojeny  do  regulace  klíčových  signálních  drah  regulujících   kmenové  vlastnos_  nádorových  buněk.   MikroRNA  v  patogenezi  nádorových  onemocnění   NEW!   Slaby  et  al.,  Galen,  2012   MikroRNA  se  podílejí  na  regulaci  klíčových  procesů  autofagie,  jako  jsou  signalizace  mTOR,     skládání  komplexu  ULK1,  interaktom  proteinu  Beclin-­‐1  nebo  ATG4  signalizace.   MikroRNA  jako  biomarkery   Slaby  et  al.,  Mol  Cancer,  2009   SNP  a  mikroRNA,  rizikové  faktory   1.  SNPs v biogenetické dráze miRNA 2.  SNPs v sekvenci pri, pre a maturované miRNA 3.  SNPs ve vazebných oblastech pro miRNA G/A  ITGB4  (miR-­‐34a)  Brendle  et  al,  Carcinogenesis  2009   Slaby  et  al.,  J  Cell  Mol  Med,  2011   SNP  a  mikroRNA   SNP  ve  vazebných  místech  pro  miRNA  regulované  chemoprotektanty   NEW!   Slaby  et  al.,  Nutri_on  and  Cancer,  2012   Weber  et  al.,  Clin  Chem,  2010   Cirkulující  mikroRNA  jsou  přítomny  ve  dvanác`  typech  tělních  teku`n   Původ  cirkulujících  mikroRNA   Redova,  Slaby,  Future  Oncology  2013   Gilad  et  al.,    2008     Stabilita  cirkulujících  mikroRNA   Příčina  stability  cirkulujících  mikroRNA   Mlcochova  et  al.,  Urologic  Oncology    2013     Sérové  mikroRNA  jako  diagnos`cké  biomarkery  u  CRC   Ng et al, GUT, 2009 89%  senzi_vita   70%  specificita   ALE…..   Normalizovan -dCt ) 0,0001 0,001 0,01 Zdraví CRC Normalizovan áexprese(2 -dCt ) 0,0001 0,001 0,01 0,1 1 Zdraví CRC Normalizovan áexprese(2 -dCt ) 0,01 0,1 1 10 100 Zdraví CRC miR-­‐17-­‐3p   (P  =  0,65)   miR-­‐29a   (P  =  0,27)   miR-­‐92a   (P  =  0,90)   •       miR-­‐17-­‐3p,  miR-­‐29a,  miR-­‐92a,  miR-­‐135b   •       endogenní  kontrola:  miR-­‐16       •       100  pacientů,  30  zdravých  dárců   ČESKÁ  REPUBLIKA   Sérové  mikroRNA  jako  diagnos`cké  biomarkery  u  CRC   Faltejskova et al, Cancer Biomarkers, 2012 Vliv  hemolýzy  na  hladiny  vybraných  sérových  mikroRNA   Unpublished data, 2013 0   20   40   60   80   100   120   140   160   180   miR-­‐21   let-­‐7a   miR-­‐106a   miR-­‐451   miR-­‐16   hemolýza  0   hemolýza  1   hemolýza  2   hemolýza  3   hemolýza  4   Vliv  normalizace  dat  na  hladiny  sérových  mikroRNA   30  zdravých  dárců,  30  pacientů  s  CRC,  30  pacientů  s  RCC   9  genů/miRNA  nejčastěji  používaných  k  normalizaci  exprese  miRNA  v  tělních  teku_nách:   let-­‐7a,  miR-­‐16,  miR-­‐93,  miR-­‐103,  miR-­‐106a,  miR-­‐191,  miR-­‐192,  miR-­‐223  and  RNU43     Iden_fikace  nejvíce  vhodných  referenčních  genů  užium  NormFinderu  a  GeneNormu   Vliv  normalizace  dat  na  hladiny  sérových  mikroRNA   Užin  rozdílných  přístupů  k  normalizaci  exprese  cirkulujících   mikroRNA  může  vést  ke  zcela  rozdílných  výsledkům!     normalizedexpression 0,001 0,01 0,1 1 zdravi nemocni 10 100 1000 10000 healthy tissue tumour tissue 0   50   0.00001   0.001   0.1   10   1000   Cq  value   concentra`on  of  miR-­‐21  (log10,  pmol·∙l-­‐1)   miR-­‐21   P<0.001   Absolute  quan_fica_on   miR-­‐16  as  reference  gene   P<0.001   let-­‐7a  as  reference  gene   CRC   CRC   CRC  HC   HC   HC   ZVÝŠENÁ  HLADINA   ZVÝŠENÁ  HLADINA  SNÍŽENÁ  HLADINA   Petra  Faltejsková   MiR-­‐21  jako  biomarker  u  kolorektálního  karcinomu   amountofmoleculesper1ngofRNA(log10) 10 100 1000 10000 healthy tissue tumour tissue healthy   donors   CRC   pa_ents   amount  of  molecules  per    1  ng  of  RNA     miR-21 P = 0.0004 10 100 1000 10000 stage amountofmoleculesper1ngofRNA(log10) 1 2 3 4 amount  of  molecules  per    1  ng  of  RNA    (log10)   P  <  0.0001   P  =  0.0004   N=125   N=125   TNM  STAGE   Slaby  et  al,  Oncology  2007   Faltejskova  et  al,  Int  J  Colorectal  Disease  2011   unpublished data 2013 miR-21 P < 0.0001 0 100 200 300 400 30 40 50 60 70 80 90 100 OS (days) Survivalprobability(%) value low level of miR-21 high level of miR-21 Cirkukující  sérové  mikroRNA  v  diagnos`ce  renálního  karcinomu   Vzorky  krevního  séra  rozdělené  do  skupin  na  základě  rozdílné  exprese  miRNA  (žlutá  barva   znamená  vzorky  pacientů  s  renálním  karcinomem,  modrá  pak  vzorky  kontrolních  jedinců,   vyhodnoceno  metodou  LIMMA,  p<0001)   Redova et al., J Transl Med 2012 Vzorky  pacientů   Vzorky  kontrol   é  ê   Škála  hladin  mikroRNA   Robert  Iliev   Cirkukující  sérové  mikroRNA  v  diagnos`ce  renálního  karcinomu   miR-378 Pacienti K ontroly 0 1000 2000 3000 miR-210 Pacienti K ontroly 0 50000 100000 150000 unpublished data 2014 N=215   N=125   P<0.0001   P<0.0001   Sensi`vity  80%   Specificity  76%   AUC=0,848     miR-­‐378+miR-­‐210   Močové  mikroRNA  jako  diagnos`cké  biomarkery  uroteliálního  karcinomu   4    zdraví  dobrovolníci     odběry  3x  denně  po  dobu    5  dnů   nepublikovaná data, 2013 Jarda  Juráček   Hanka     Mlčochová   Močové  mikroRNA  jako  diagnos`cké  biomarkery   uroteliálního  karcinomu   59  miRNA   P<0,01   MikroRNA  jako  diagnos`cké  biomarkery  NSCLC  ve  sputu   SPINOCELULÁRNÍ  KARCINOM   Xing  et  al,  Mod  Pat,  2010   ADENOKARCINOM   Yu  et  al,  IJC,  2010   MikroRNA  jako  tkáňové  biomarkery   Rozdílné expresní profily mikroRNA mezi nádorovou a nenádorovou tkání Volinia et al., PNAS, 2006 HCL analýza 540 vzorků nádorových a paralelních nenádorových tkání šesti typů solidních nádorů. Žlutá znamená zvýšenou a modrá sníženou expresi v tumoru MikroRNA  jako  tkáňové  biomarkery   MikroRNA  jako  tkáňové  biomarkery  spojené  se  známými  histologickými  a   molekulárními  podtypy  nádorových  onemocnění   mikroRNA nepodléhají degradačním procesům během formalínové fixace a archivace v parafinových blocích jako je tomu u mRNA è ARCHIVY FFPE MATERIÁLU NA PATOLOGIÍCH JE TAK MOŽNÉ VYUŽÍVAT PRO ROZSÁHLE RETROSPEKTIVNÍ STUDIE versus mikroRNA z FFPE mRNA z FFPE Yaguang Xi, RNA, 2007, 13:1–7 MikroRNA  jako  tkáňové  biomarkery   Nair et al, JNCI, 2012 MikroRNA  jako  prognos`cké  tkáňové  biomarkery   Meta-­‐analýza  43  studií  u  různých  typů  nádorových  onemocnění   n = 58 % Age Median (ranges) 56 (24 - 71) ≤50 18 31 >50 40 69 Gender Male 34 59 Female 24 41 Resection Total 9 15 Subtotal 41 71 Parcial 8 14 Performance status 0 4 7 1 48 83 2 6 10 Adjuvant TMZ Yes 31 53 No 27 47 ! X44 X140 X42 X51 X28X29 X36 X32 X49 X118X5.1 X139 X20 X85 X127X26 X86 X43 X89 X52 X90 X72 X98 X91 X33 X19 X38 X71 X95 X34 X35 X60 X104 X16X22 X45 X138 X61 X137X142 X25 X75 X99X78 X94 X87 X83 X69X40 X59 X93 X114 X47X80 X39 X31 X77 X18X8 X2 X5 X3 X1X9 X7 X10 X4 X6 miR-500_prv ni miR-133b miR-504 miR-1296 miR-129# miR-107 miR-488_prv ni miR-1247 miR-1243 miR-220 miR-23b miR-139-3p miR-874 miR-1245 miR-1291 miR-10b# miR-106b# miR-196b miR-21# miR-155 miR-21 miR-886-5p miR-886-3p miR-888 miR-19b-1# miR-128a miR-139-5p miR-328 MikroRNA  rozdílně  vyjádřené  v  nádorové  tkáni  glioblastomu   p<0.00001   Sana  J,  Carcinogenesis,  2014   Jiří  Šána   Andrej  Bešše   0 5 10 15 20 25 0.00.20.40.60.81.0 time (months) PFS > threshold < threshold p<1.01e-06 0 5 10 15 20 25 0.00.20.40.60.81.0 time (months) PFS MGMT 0 MGMT1 p<0.0309 nepublikovaná  data,  2014   Prognos`cká  sada  6-­‐miRNA  u  pacientů  s  glioblastomem   9,8  měs.   4,4  měs.   7,8  měs.   7  měs.   0 10 20 30 40 0.00.20.40.60.81.0 time (months) OS > threshold < threshold p<1.34e-06 0 10 20 30 40 0.00.20.40.60.81.0 time (months) OS MGMT 0 MGMT1 p<0.0202 nepublikovaná  data,  2014   Prognos`cká  sada  6-­‐miRNA  u  pacientů  s  glioblastomem   16,2  měs.   7,5  měs.   16  měs.   12  měs.   Replacement  of  miR-­‐31  in  GBM  cells   MikroRNA jako terapeutické cíle Wurdinger et al., Pharmacogenomics J, 2008 Iorio et al., EMBO Mol Med, 2012 Nádorově  supresorová   mikroRNA   Subs`tuční  terapie   In  vitro  analýza  funkce  mikroRNA  u  kolorektálního  karcinomu   Jaká  je  role  miR-­‐215  v  buňkách  kolorektálního  karcinomu?   HCT-­‐116+/+   HCT-­‐116-­‐/-­‐   SW-­‐620  HT-­‐29  DLD-­‐1   miR-215 P < 0,0001 0,0001 0,001 0,01 0,1 1 10 foldchange(log) zdravá sliznice nádorová tkáň EP   TT   miR-­‐215   N=240  párových  vzorků   Faltejskova  et  al.,J  Cell  Mol  Med  2012   Petra   Faltejsková         –            MiR-­‐215  je  asociována  s  klinickým  stádiem  a  přežíváním  pacientů  s  CRC   unpublished data 2014 Low  expression   High  expression                     0   50   100   150   200   0   24   48   72   96   120   number  of  cells  [in  thousands]   `me  [hours]   HCT-­‐116+/+     pre-­‐nega_ve  control  10  nM   pre-­‐miR-­‐215  10  nM   0   50   100   150   200   250   0   24   48   72   96   120   number  of  cells  [in  thousands]   `me  [hours]   HCT-­‐116-­‐/-­‐     pre-­‐nega_ve  control  10  nM   pre-­‐miR-­‐215  10  nM   0   100   200   300   400   500   0   24   48   72   96   120   number  of  cells  [in  thousands]   `me  [hours]   DLD-­‐1   pre-­‐nega_ve  control  10  nM   pre-­‐miR-­‐215  10  nM   P  =  0.0168   P  =  0.0122   P  =  0.0273   In  vitro  analýza  funkce  mikroRNA  u  kolorektálního  karcinomu   unpublished data 2014 0   10   20   30   40   50   HCT-­‐116   Cell  apoptosis  rate  [%]   pre-­‐nega_ve  control  10  nM   pre-­‐215  10  nM   P  <  0.001   0.0   20.0   40.0   60.0   80.0   G1   S   G2   cell  cycle  [%]   HCT-­‐116+/+   pre-­‐nega_ve  control  10  nM   pre-­‐215  10  nM   P  =  0.01   In  vitro  analýza  funkce  mikroRNA  u  kolorektálního  karcinomu:   vliv  na  apoptózu  a  buněčný  cyklus   0   0.5   1   1.5   2   2.5   3   DLD-­‐1   Množství  apopto`ckých  buněk  (%)   control  oligonucleo_de  (10nM)   pre-­‐miR-­‐215  (10nM)   P  <  0.05   unpublished data 2014 ↓  50%   In  vitro  analýza  funkce  mikroRNA  u  kolorektálního  karcinomu:   vliv  na  migrační  potencíl  nádorových  buněk   Jaké  jsou  cíle  miR-­‐215???   TYMS  XIAP   CD164  EREG  HOXB9   PROLIFERACI   APOPTÓZA   BUNĚČNÝ  CYKLUS   MIGRACE   ZEB2   unpublished data 2014 0   0.2   0.4   0.6   0.8   1   1.2   1.4   24h   48h   72h   96h   normalizovaná  exprese   TYMS   mock   miR-­‐215   0   0.2   0.4   0.6   0.8   1   1.2   24h   48h   72h   96h   normalizovaná  exprese   CD164   mock   miR-­‐215   0   0.2   0.4   0.6   0.8   1   1.2   24h   48h   72h   96h   normalizovaná  exprese   XIAP   mock   miR-­‐215   *   *   *   **   ***   ***   **   **   **   **   Jaké  jsou  cíle  miR-­‐215???   unpublished data 2014                     0   0.2   0.4   0.6   0.8   1   1.2   24h   48h   72h   96h   normalizovaná  exprese   HOXB9   mock   miR-­‐215   0   0.2   0.4   0.6   0.8   1   1.2   24h   48h   72h   96h   normalizovaná  exprese   EREG   mock   miR-­‐215   **   ***   ***   ***   ***   ***   ***   ***   Jaké  jsou  cíle  miR-­‐215???   unpublished data 2014 Vliv  navýšení  hladin  miR-­‐215  na  nádorový  růst  in  vivo   HCT-­‐116+/+  (clone  33)   unpublished data 2014 Jana   Merhautová   MikroRNA jako terapeutické cíle Seznam mikroRNA které jsou testovány jako potenciální terapeutické cíle x   MikroRNA ja ko terapeutické cíle Miravirsen, anti-miR-122 MikroRNA jako terapeutické cíle: from bench to bedside MRX34 – hepatocelulární karcinom a jaterní metastázy Masarykův  onkologický  ústav   Doc.  MUDr.  Marek  Svoboda,  Ph.D.   Prof.  MUDr.  Ros_slav  Vyzula,  Ph.D.,  Prof.  MUDr.  Pavel  Šlampa,  CSc.   Doc.  MUDr.  Jan  Doležel,  Ph.D.   MUDr.  Radek  Lakomý,  Ph.D.,  MUDr.  Alexandr  Poprach,  Ph.D.,  MUDr.  Michal  Staník,  Ph.D.,  MUDr.  Radim  Němeček,..   FN  Brno   prof.  MUDr.  Zdeněk  Kala,  CSc.,  doc.  MUDr.  Leoš  Křen,  Ph.D.,  prof.  MUDr.  Dalibor  Pacík,  CSc.,  MUDr.  Michal  Fedorko,   MUDr.  Jan  Hlavsa,  Ph.D.,….  FNuSA  Brno  –  prof.  MUDr.  Markéta  Hermanová,  Ph.D.,  doc.  MUDr.  Radim  Jančálek,  Ph.D.   doc.  RNDr.  Ondřej  Slabý,  PhD   postdocs   Mgr.  Mar_na  Rédová,  PhD   dpc.  MUDr.  Marek  Svoboda,  PhD   doc.  MUDr.  Julie  Bienertová-­‐Vašků,  PhD Nithyananda  Thorenoor,  PhD   PhD  studen_   Mgr.  Renata  Héžová   Mgr.  Jiří  Šána   Mgr.  Petra  Faltejsková   Mgr.  Hana  Mlčochová   Mgr.  Robert  Iliev   Mgr.  Zbyněk  Čech   Mgr.  Jana  Merhautová   Mgr.  Andrej  Bešše   Mgr.  Jitka  Mlčochová   Mgr.  Jaroslav  Juráček   Pregraduální   studen_   Bc.  Anna  Čurdová   Bc.  Renata  Kleinová   Bc.  Zdeňka  Kosařová   Bc.  Soňa  Klusová   Bc.  Zuzana  Ožanová   Poděkování   CEITEC,  Skupina  Molekulární  onkologie  II