Média s vodou nemísitelná Barvení trvalých preparátů •nejpoužívanější •Abies balsamea, A. canadensis •vysoký index lomu 1,535 •dobře konzervuje •neodbarvuje •rozpustný v xylenu, benzenu, toluenu •s vodou – bílý zákal •s alkoholem – olejovité kapky •suší se v termostatu při 40°C •hustý se ředí xylenem KANADSKÝ BALSÁM DAMMARA •polofosilní pryskyřice stromů r. Dammara, Austrálie, Nový Zéland •vlastnosti a zacházení stejné jako KB • •EUKITT – syntetická pryskyřice před montováním do kanadského balsámu -vzestupná alkoholová řada pro odvodnění a projasnění •základní řada •70% - 96% - • karbol-xylen, xylen, KB • hřebíčkový olej 3:1, 1:1, 1:3, KB • Bioclear – netoxická náhrada xylenu •doba odvodnění od 5 minut do půl hodiny podle velikosti objektů • •pokud špatně odvodníme, objekt se mléčně zakalí a je neprůhledný • •opakovat odvodnění • •100% alk. můžeme vynechat •základní řadu můžeme modifikovat podle vlastních potřeb zkrácená cesta fenol-alkohol •pro objekty s malým množstvím měkkých tkání – ústní ústrojí hmyzu úkol 1. nebarvený objekt - preparát z klíštěte obecného Ixodes ricinus, fixovaného v 70% alkoholu vzestupná alkoholová řada do Petriho misek 70% alk (5min.) – 96% alk.(10 min) – Karbol-xylen (5 minut) –xylen (5 minut)– pak rychle přeneseme odvodněný a projasněný objekt do kanadského balsámu Barvení •kyselá barviva – plasma (eosin) •zásaditá – jádro (hematoxylin, karmín) •neutrální (Giemsa) • •přírodní barviva • živočišná: Dactylopius coccus (nopálovec karmínový) = karmín • • • • • • rostlinná: Hematoxylon campechianum (kampeška čínská) = hematoxylin (fialová barva, vypírání ve vodovodní vodě); lišejníky – orcein • • • •umělá (anilinová) - eosin 220px-Indian_collecting_cochineal http://www.vulkaner.no/t/lanza/pics/lus3.jpg http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/9/99/Dactylopius_coccus_%28Barlovento%29_03_ies.jpg This item is an image http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a1/Haematoxylon_campechianum0.jpg •progresivní barvení – barvíme do žádaného stupně •regresivní – přebarvíme, diferencujeme •in toto – celý bloček před řezáním •sukcedánní – přenos do několika barevných roztoků •simultánní – několika barvivy současně • •otrochromatické – stejná barva jako roztok •metachromatické – jedna barva různé složky tkáně barevně odlišně •difůzní – stejná intenzita i odstín •elektivní – různá intenzita • •barvení v mikrovlnné troubě 2. barvíme motolice železitým acetokarmínem – regresivní způsob barvení (přebytečné barvivo se odstraní diferenciací v kyselém alkoholu) •5 petriho misek • •kyselý alkohol -70% - 96% - karbol-xylen, xylen • do odbarvení 5 min 15 5 5 • • • • • kyselý alkohol 70%A 96%A karbol-xylen xylen Vnitřní organizace u motolice kopinaté (Dicrocoelium dendriticum): Hysteromorphatriloba •Ixodes ricinus (klíště obecné) • •70% (5´) - 96% (10´)- •karbol-xylen (5´) – xylen (5´)– KB •nebarvený objekt • •motolice •Hysteromorpha triloba •barveno železitým acetokarmínem •regresivní barveni •kyselý alkohol (do odbarvení) – 70% (5 min) - 96% (10 min)-karbol-xylen (5 min)- xylen (5 min) - KB Úkol č. 1 Úkol č. 2 strigeidní motolice -1. MH = šnek -2. MH = ryba -DH = rybožravý pták (pelikán, kormorán larva nymfa samice samec přísavky Brandesův orgán •Ixodes ricinus (klíště obecné) • •70% (5´) - 96% (10´)- •karbol-xylen (5´) – xylen (5´)– KB •nebarvený objekt • •motolice •Lutztrema sp. •barveno železitým acetokarmínem •regresivní barveni •kyselý alkohol (do odbarvení) – 70% (5 min) - 96% (10 min)-karbol-xylen (5 min)- xylen (5 min) - KB Úkol č. 1 Úkol č. 2 Distomní motolice larva nymfa samice samec přísavky http://www.phsource.us/PH/HELM/Helminth_images/Lutztrema.gif děloha •Blecha ježčí (Ceratophyllus erinacei) • •70% (5´) - 96% (10´)- •karbol-xylen (5´) – xylen (5´)– KB •nebarvený objekt • • Echinostomní motolice •barveno železitým acetokarmínem •regresivní barveni •kyselý alkohol (do odbarvení) – 70% (5 min) - 96% (10 min)-karbol-xylen (5 min)- xylen (5 min) - KB Úkol č. 1 Úkol č. 2 • •firma Merck •Montovací média - nevodná •Entellan (index lomu n=1,5) obsahuje toluen 1.07961 •Entellan new (index lomu n=1,49-1,5) obsahuje xylen •Kanadský balzám (index lomu n=1,515-1,530) •Kanadský balzám roztok v xylenu (2+1) (index lomu n=1,515-1,530) •Merckoglas (index lomu n=1,50-1,51) obsahuje toluen •Merckoglas new (index lomu n=1,5) (kapalné krycí sklo) •Neo-Glass (index lomu n=1,5) montovací médium pro aplikaci s EM-sprayerem a Neo-Clearem •Neo-Mount (index lomu n=1,44) montovací médium po použití Neo-Clearu •