MIKROSKOPICKÉ HOUBY – CVIČENÍ I.

1.         Stanovení celkového počtu směsné populace plísní v ovzduší vnitřního prostředí
sedimentační metodou


Princip: Sedimentační (gravitační) metoda využívá schopnost mikroorganismů sedimentovat na pevné
povrchy. Tato metoda by neměla být používána při hodnocení prostor, které využívají oběhový vzduch.
Jedná se o všechny typy klimatizačních zařízení s turbulentním či laminárním prouděním vzduchu.

Pomůcky: Petriho misky s médiem (DRBC – Chloramfenikolový agar s dichloranem a bengálskou červení)
o průměru 84 - 90 mm.

Pracovní postup:

1.      Ve středu místnosti, v inhalační zóně ve výšce 160 cm nad zemí se umístí dvě uzavřené
Petriho misky s médiem. Vzdálenost mezi miskami je nejméně 10, maximálně 30 cm.

2.      Poté se misky otevřou a osoba, která provádí odběr, opustí interiér. Přítomnost a pohyb
dalších osob ve sledovaném interiéru je vyloučen.

3.      Po 1 hodině se Petriho misky uzavřou.

4.      Inkubace se provádí při teplotě 25 ± 1 °C po dobu 3-5 dnů.

5.     Po inkubaci se spočítají vyrostlé kolonie mikroskopických vláknitých hub.


Výpočet, vyjádření výsledků a hodnocení při sedimentační metodě: Vypočte se aritmetický průměr
počtu kolonií z obou Petriho misek. Tento počet se přepočítá na dobu expozice 1 hodina. Výsledek je
tedy vyjádřen jako celkový počet plísní, které sedimentovaly na misku za jednu hodinu.


Hodnocení: Pro pobytové místnosti se považují hodnoty 50 KTJ plísní / Petriho misku / hod. za
hodnoty, které přibližně odpovídají kategorii znečištění střední dle EUR 14988.


Poznámka: Pokud se využívá pro mikrobiologicko-hygienické hodnocení prostředí tato metoda, mělo by
vždy být vyjádřeno i relativní znečištění, tj. provést i stanovení mikroorganismů ve venkovním
ovzduší.


Odhad doby expozice otevřených agarových misek při sedimentační metodě


Odběrové místo

                                                          Doba expozice (hodiny)

Prostory se zvýšeným požadavkem na čistotu

                                                          4

Prostory s běžnými nároky na kvalitu prostředí

                                                          1

Prostory s předpokládaným znečištěním ovzduší bioaerosolem

                                                          0,3 - 0,5


Literatura:

1.      EUR 14988 (Report No. 12: Biological Particles in Indoor Environments, Commission of the
European Communities, Report No. 12, Luxembourg, 1994)

2.      Standardní operační postupy pro vyšetřování mikroorganismů v ovzduší a pro hodnocení
mikrobiologického znečištění ovzduší ve vnitřním prostředí. Acta hygienica, epidemiologica et
microbiologica. Příloha č. 1/2002


2.         Izolace mikroskopických hub z osiva (seed born fungi)

Materiál: obilky pšenice

Pomůcky: 2% roztok dezinfekčního přípravku SAVO, minutky, sterilní detilovaná voda, sterilní
pinzeta, kultivační médium (PDA – potato dextrose agar)

Pracovní postup:

1.     Provedeme povrchovou dezinfekci vložením 5 obilek do 2% roztoku dezinfekčního přípravku SAVO
(tj. 0,1 % NaClO) na dobu 10 minut.

2.     Poté osivo třikrát opláchneme sterilní destilovanou vodou.

3.     Sterilní pinzetou rozmístíme obilky na povrch PDA (obr. 3).

4.     Kultivujeme ve tmě, při teplotě 25 °C po dobu deseti dnů.

5.     Příprava čisté kultury

6.     Identifikace


3.         Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu

Materiál: sýr (Niva, Hermelín, aj.)

Pomůcky: preparační jehla, kultivační médium (MEA – malt extrakt agar), termostat na 25 °C

Pracovní postup:

1.     Vyžíhanou preparační jehlou přeneseme kousky ušlechtilé plísně z povrchu nebo vnitřního řezu
sýrů na povrch kultivačního média.

2.     Kultivujeme ve tmě, při teplotě 25 °C po dobu 7 dnů.

3.     Mikroskopování


4.         Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu

Materiál: koření, bylinné čaje

Pomůcky: pinzeta, kultivační médium (MA2% – Malt Extrakt Agar s chloramfenikolem), termostat na 25
°C

Pracovní postup:

1.      Vyžíhanou (ne horkou) pinzetou přeneseme kousky vzorku na povrch kultivačního média.

2.      Kultivujeme ve tmě, při teplotě 25 °C po dobu 7 dnů.

3.      Mikroskopování, identifikace