DALŠÍ G+ BAKTERIE
praktikum č. 3
Lékařská mikrobiologie – cvičení
Mikrobiologický ústav LF MU
www.pinterest.com
Z minulých cvičení byste měli znát
 Základní mikrobiologické půdy
 Klinický význam stafylokoků, odlišení S.aureus od CoNS,
význam a detekce koagulázy a hyaluronidázy, MRSA
 Biochemické metody identifikace - % pravděpodobnosti,
Tin, kataláza, oxidáza, PYR test
 Klinický význam streptokoků, dělení dle hemolýzy,
odlišení S.pyogenes a S.agalactiae (PYR test, CAMP
test), určení S.pneumoniae (optochinový test), ASLO
Přehled G+ bakterií
Cvičení Tvar Zástupci
P01 koky Stafylokoky (S.aureus, CoNS)
P02 koky Streptokoky (viridující, hemolytické)
P03 koky Enterokoky
tyčky Listerie, Bacily, Korynebakteria
Listerie a korynebakteria nesporulují, bacily sporulují.
Obsah cvičení
 Charakteristika enterokoků
 Charakteristika G+ tyčinek
 Léčba infekcí způsobených enterokoky a G+ tyčinkami
 Diagnostika enterokoků a G+ tyčinek
 Diferenciální diagnostika enterokoků a G+ tyčinek
 Praktické úkoly
 G+ koky v drobných shlucích či krátkých řetízcích
 Vysoká odolnost – 6,5 % NaCl (pozor – stafylokoky až 10
% NaCl!), žluč, azid sodný, pH 4,8 - 11
 Kataláza NEG
 Klinický význam:
 Součást normální mikroflóry střeva
 Jedni z nejběžnějších původců močových infekcí
 Nozokomiální infekce (rány, sepse, endokarditidy,
implantáty, atd.)
 Primární rezistence k cefalosporinům
 E. faecalis (90%), E. faecium a další
 Nebezpečné VRE – vankomycin rezistentní enterokoky
Charakteristika enterokoků
http://biowiki.hgtc.edu
Charakteristika G+ tyčinek - listerie
 G+ krátké tyčinky
 Výskyt: v prostředí a potravinách (mléko, sýry, zelenina,
maso, půda, listí…),
 Vysoká odolnost - růst při nízkých teplotách (4 °C –
lednička, sýrárny) a vysokých koncentracích NaCl či žluči
 Kataláza POZ
 L. monocytogenes, L. ivanovi, L. innocua aj.
http://cit.vfu.cz
Charakteristika G+ tyčinek - listerie
 Klinický význam:
 Listerióza - gastroenteritida, horečnaté onemocnění,
málokdy infekce u zdravých dospělých
 Riziko pro těhotné - hrozí kongenitální infekce plodu přes
placentu (možný potrat) nebo (ve třetím trimestru) infekce
plodu, nebo také perinatální infekce při porodu
(kontaminovaný poševní sekrete).
 Novorozenci - typická meningitida či sepse (málo časté,
vysoká letalita)
 Lidé s oslabenou imununitou – infekce ran, sepse,
meningitidy
Charakteristika G+ tyčinek -
korynebakteria
 Korynebakteria jsou grampozitivní tyčinky kyjovitého
tvaru (koryné = kyj), některá pleomorfní, mohou být
gramlabilní.
 Odolné k vyschnutí a koncentraci NaCl, ale nerostou na
MH agaru bez krve. Tvoří palisády a tzv. havraní křídla.
 Kataláza POZ
 Corynebacterium diphtheria – záškrt, díky očkování
vzácný
 Nedifterická (= nezáškrtová)
korynebakteria –
součástí běžné mikroflóry kůže.
http://pixcooler.com
Charakteristika G+ tyčinek -
korynebakteria
 Klinický význam:
 Záškrt - pseudomembranózní angina (pablány, otok).
Vznik pouze pokud kmen bakterie produkuje difterický
toxin (ten do buňky vnáší tzv. β-fág). Charakteristický
oteklý krk, při absenci terapie smrt udušením.
www.wikipedia.org
Charakteristika G+ tyčinek - bacily
 G+ mohutné tyčinky s rovnými konci
 Pohyblivé, sporulující - jedna endospora (terminální,
subterminální či centrální)
 Kataláza POZ
 Většina zástupců – neškodné mikroby vnějšího prostředí.
 V klinice většinou kontaminace.
 Několik významných zástupců – Bacillus anthracis,
Bacillus cereus, Geobacillus (dříve Bacillus)
stearothermophillus a Bacillus subtilis
www.cropsoil.uga.edu
Charakteristika G+ tyčinek - bacily
 Klinický význam:
 Bacillus anthracis - obligátní patogen, původce
veterinárního onemocnění – antraxu – potenciál
biologické zbraně. Jedna z prvních nákaz, na kterých byla
zkoušena vakcinace.
 Bacillus cereus – enterotoxikózy, infekce oka.
Imunokompromitované osoby - infekce ran, endokarditidy,
sepse.
 Geobacillus stearothemophillus a Bacillus subtilis schopnost
přežívat při velmi vysokých teplotách 
použití: indikátory účinnosti sterilizátorů.
Enterokoky a G+ tyčinky: léčba
 Enterokoky a listerie – primární rezistence na
cefalosporin. Enterokoky také primárně rezistentní na
makrolidy, linkosamidy.
 E.faecalis – citlivý na ampicilin, ale E.faecium – primárně
rezistentní.
 Možné použití ko-trimoxazolu, doxycyklinu, jako rezerva
vankomycin.
 VRE – vankomycin rezistentní kmeny (hlavně u
hematoonkoligkých pacientů)  linezolid (ZYVOXID),
případně dalfopristin/quinupristin (SYNERCID).
Enterokoky a G+ tyčinky: diagnostika
– přehled kultivace a mikroskopie
Enterokoky Listerie Korynebakteria Bacily
Mikroskopie
G+ koky v
krátkých
řetízcích
G+ tyčinky
řetězící se
za sebou,
palisády
G+ tyčinky
skládající se
vedle sebe jako
palisády
nebo "havraní
křídla"
G+ robustní
tyčinky,
možná
sporulace
Kultivace
šedavé,
většinou bez
hemolýzy (ale
možná
viridace i
hemolýza)
podobné
enterokokům,
hemolýza
možná
velmi drobné
kolonie
(podobné mouce)
plsťovité
kolonie,
někdy
výrazná
hemolýza
Diagnostika: enterokoky
 Kataláza NEG
 Růst na žluč – eskulinové půdě, na Slanetz – Bartleyho
agaru.
 Biochemie – štěpení arabinosy (E. faecalis neštěpí 
půda je zelená, E. faecium štěpí  půda žloutne)
 Antigenní analýza - zpravidla se nepoužívá.
 Testy citlivosti – běžný MH agara. Existují i půdy na
screening VRE.
Foto: archiv ústavu
Diagnostika: G+ tyčinky
 Kataláza POZ u všech tří skupin (ale např. u rodu
Arcanobacterium blízkého korynebakteriím je negativní!)
 Biochemickyé rozlišení koryneformních tyčinek navzájem
– API Coryne, Remel)
 Diagnostika listerií – růst při nízkých teplotách, vysokých
koncentracích NaCl a hemolytické interakce.
 Průkaz antigenu – průkaz difterického toxinu Elekovým
testem (viz. dále).
Diferenciální diagnostika: enterokoky
 Gramovo barvení: grampozitivní koky x grampozitivní
tyčinky x ostatní bakterie.
 Stafylokoky odliší pozitivní kataláza a růst na NaCl (10
%!).
 Streptokoky odliší nepřítomnost růstu na Slanetz –
Bartleyho či žluč – eskulinové půdě, popř. PYR testem
(kromě S. pyogenes negativní).
 Vzájemné rozlišení je možné arabinózovým testem nebo
složitějším testem – ENCOCCUS test – 8 reakcí.
Diferenciální diagnostika: bacily
 Gramovo barvení: grampozitivní koky x grampozitivní
tyčinky x ostatní bakterie.
 Bacily se navíc projeví už v Gramově barvení coby velmi
rozměrné (robustní) tyčinky. Často, ale ne vždy,
můžeme také pozorovat tvorbu endospor.
 Kultivace – velké, plsťovité kolonie.
 Druhové určení je možné biochemickými testy, testy
citlivosti na antibiotika apod.
 U G+ tyčinek ale není jednoznačný algoritmus!
Diferenciální diagnostika: listerie a
koryneformní tyčinky
 Gramovo barvení: grampozitivní koky x grampozitivní
tyčinky x ostatní bakterie.
 Nesporulují, nejsou robustní – vyloučeny bacily.
 Spolehlivější dourčení – biochemie, růst při různých
teplotách (listerie 4°C), testy hemolytických interakcí.
 U G+ tyčinek ale není jednoznačný algoritmus!
Diferenciální diagnostika: listerie
 Chromogenní půda na diagnostiku listerií – ALOA
– modré zbarvení kolonií listerií, patogenní druhy
mají kolem sebe tzv. HALO = odlišně zbarvené
okolí.
www.oxoid.com
Diferenciální diagnostika:
koryneformní tyčinky
 Detekce difterického toxinu
za použití speciálního papírku
s antitoxinem – položen na povrch
agaru, kam se posléze očkují
testované kmeny.
 Pozitivní výsledek =
precipitační linie.
http://www.rahulgladwin.com
Úkol č. 1 – Gramovo barvení
 Obarvěte podle Grama osm podezřelých kmenů (pro
zopakování: natřít  nechat uschnout  fixovat
plamenem  poté barvit: Gram 30 s  Lugol 20-30 s 
opláchnout vodou  alkohol 15-20 s  opláchnout
vodou  safranin 60  opláchnout vodou  osušit
filtračním papírem (nedrhnout buničinou ani ničím
jiným!)  imerzní objektiv - olej)
 Odlišíte jednu G- bakterii. Zbytek budou G+ koky a
tyčinky.
Úkol č. 2 – Morfologie kolonií
 Popište všechny kmeny, které se v úkolu č. 1 barvily
jako grampozitivní. Popište velikost, barvu, tvar, profil a
hemolytické vlastnosti. Podle možnosti popište i další
(povrch, okraje, konzistence, průhlednost, zápach).
 Pokuste se odhadnout, který z G+ koků by mohl být
stafylokok (bílý, máslovité kolonie)
 Pokuste se odhadnout, která z G+ tyčinek je Listeria,
Bacillus a Corynebacterium.
Úkol č. 3 – Kataláza, ŽE, Slanetz-
Bartley
 3a) Kataláza – enterokoky negativní, G+ tyčinky
pozitivní (pozitivní také G+ stafylokok, negativní také
G+ streptokok).
 3b) Růst na Slanetz-Bartleyho půdě (přídavek azidu
sodného) – rostou enterokoky.
 3c) Růst na žluč-eskulinovém agaru – kmen, který zde
roste a zároveň neroste na Slanetz-Bartleyho půdě 
Listeria.
Úkol č. 4 – Vzájemné rozlišení
enterokoků
 4a) Arabinózový test – kolonie se smísily s arabinózou
 inkubace. E. faecalis neštěpí  půda je zelená, E.
faecium štěpí  půda žloutne.
 4b) ENCOCCUStest – 8 reakcí. Neurčujte index
typičnosti a % pravděpodobnosti (nemáte jak).
Úkol č. 5 – Diagnostika listerií
 5a) Růst při 4°C – jediná Listeria dokáže růst při
chladničkových teplotách (z jiných bakterií např. Yersinia,
některé druhy pseudomonád apod.).
 5b) Růst listerie na chromogenní půdě – ALOA půda
pro Listeria monocytogenes (slide 19).
Úkol č. 6 – Testy citlivosti
 6a) Odečtěte difúzní diskový test.Všímejte si, které
druhy potřebují pro kultivaci MH agar s přídavkem krve a
které ne.
 6b) E.faecalis – citlivý na ampicilin, ale E.faecium –
primárně rezistentní.
 6c) VRE – vankomycin rezistentní enterokoky.
Úkol č. 7 – Elekův test
 Zakreslete výsledek Elekova testu na testování
difterického toxinu. Nezapomeňte na popisky!
Po tomto cvičení byste měli znát:
 Klinický význam a diagnostiku enterokoků – jak je odlišit
od stafylokoků, streptokoků. Význam zkratky VRE.
 Klinický význam a diagnostiku G+ tyčinek – které
sporulují, které ne, význačné vlastnosti jednotlivých
zástupců (růst při nízkých teplotách, růst na
diagnostických půdách atd.).
 Možnosti terapie infekcí způsobených G+ tyčinkami a
enterokoky – rezistence, léky volby.
 Princip a význam Elekova testu.